[发明专利]一种LmCas9基因与载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.LmCas9基因，其核苷酸序列为SEQIDNO：1。

2.一种pUC57-LmCas9载体，其含有如权利要求1所述的LmCas9基因。

3.一种pUC57-LmCas9载体的构建方法，包括如下步骤：

利用人源化的huCas9序列作为参照，利用飞蝗种属的密码子偏好性，设计LmCas9序列，使得CAI＝0.89，FOP＝68，将LmCas9的理论密码子使用率优化至最佳。

4.一种昆虫基因编辑载体pAc-sgRNA-LmCas9，含有LmCas9基因和导向sgRNA。

5.一种昆虫基因编辑载体pAc-sgRNA-LmCas9的构建方法，包括如下步骤：

利用酶切方法将原载体pAc-sgRNA-huCas9中的huCas9切除，同时用同样的内切酶切割pUC57-LmCas9，然后回收原载体的骨架和LmCas9，连接后构建pAc-sgRNA-LmCas9。

6.载体pAc-sgRNA-LmCas9在昆虫基因编辑和基因功能研究中的应用。

7.一种昆虫基因编辑的方法，包括如下步骤：

将载体pAc-sgRNA-LmCas9中的sgRNA替换成为任意基因X的靶位点序列XsgRNA，获得pAc-XsgRNA-LmCas9载体，利用转染试剂转染昆虫细胞系或者注射昆虫受精卵，通过酶切或者测序检测来确定候选基因是否被基因编辑。