[发明专利]迅速测量油田污水和成品油中细菌含量的方法

说明书

本发明涉及一种迅速测量油田污水和成品油中细菌含量的方法，主要解决现有技术中测量速度较慢、不便捷、结果不准确的问题。本发明通过采用一种迅速测量油田污水和成品油中细菌含量的方法，包括箱体、细菌富集和核酸分子提取设备，所述细菌富集和核酸分子提取设备包括试剂管放置位置(1)和试剂管放置位置(4)、滤膜(2)、吸附层(3)反应池(5)、光源(6)、滤光片(7)、感光器(8)以及至少四个阀门的技术方案较好地解决了上述问题，可用于测量液体样品中细菌含量中。

技术领域

本发明涉及一种迅速测量油田污水和成品油中细菌含量的方法。

背景技术

由细菌等微生物的生命活动引起的材料的腐蚀破坏被称为微生物腐蚀(MIC)。MIC是一种普遍存在的现象。油气田、油罐、加油站、油路甚至汽车油箱中都存在着大量的细菌。每年因腐蚀而造成的经济损失在一百亿美元以上。其中最主要的腐蚀微生物为硫酸盐还原菌(SRB)，造成了美国生产油井77％以上的腐蚀损失。SRB能够在无氧环境下，以环境中的有机物为碳源，利用细菌生物膜内产生的氢，将硫酸盐还原为硫化氢，从氧化还原反应中获得能量，而金属也在此过程中被氧化腐蚀。目前SRB的检测方法主要有三种，分别为：培养检测技术、显微镜检测技术和生化直接检测技术。培养检测技术是目前应用较为广泛的一种方法，其原理是将样品做梯度稀释，在适当的培养基上进行培养，最终根据稀释倍数和细菌的阳性反应进行定量。该法的主要依据是美国石油协会API推荐的绝迹稀释法，我国石油行业标准SY/T 0532-2012《油田注入水细菌分析方法绝迹稀释法》中也有详细规定。相关专利已有报道(如CN102329851A、CN103983636A、CN1769472A、CN200510010459等)，目前市场上也存在SRB专用测试瓶可供购买。培养检测技术的优点在于操作简单、成本低廉，结果准确性较高。其主要缺点在于耗时长(2-14天)，培养菌种不完全导致定量结果偏低。一旦阴性对照组出现菌类生长，需要重做实验，很难保证重新采样结果与原样本一致。

显微镜检测技术结合了特异性染色方法与荧光计数方法，将荧光基团选择性地标记到SRB的表面，然后在荧光显微镜下计数以定量。但此种方法仍然需要短期培养以提高菌类浓度，培养周期在两天左右。虽然其操作相对简单、定量成本低，但需要染料分子的高特异性，且不能提供细菌活性的相关信息。

生化直接检测技术包含了多种具体方式【关淑霞叶海春范莹莹油田污水中硫酸盐还原菌检测技术的研究进展化学与生物工程2012 29 17】，可以检测SRB内部或表面的某种蛋白(如用酶联免疫吸附剂测定ELISA方法测定腺苷-5’-磷酸硫酸盐还原酶APS【如GB2354072B、CN103983636A、EP272916A1】)，可以检测SRB特异性的核酸分子序列(如聚合酶链式反应PCR方法【CN105112543A、CN1769472A、CN200510010459】、荧光原位杂交FISH方法【王明义梁小兵郑娅萍赵由之魏中青硫酸盐还原菌鉴定和检测方法的研究进展微生物学杂志2005 25 81】)，也可以检测SRB的代谢产物(如电位法或指示剂法测定H₂S)【李婉义赵自光硫酸盐还原菌菌量检测方法的研究—硫离子选择电极法化学传感器1991 11 64】。这些检测方法准确性高、特异性高、检测周期短(几小时左右)，但操作复杂，一般只能在专门的生化实验室内由受过训练的专业人员进行实验。其中的APS检测法相对简单，国外已有商品化的试剂盒出售，可以实现快速现场测量，但该方法的缺点有：1)同时检出所有具有APS的细菌种类，结果可能偏高；2)结果以颜色变化为指标定量不准确；3)细菌裂解可能不彻底造成检出结果偏低。

综上所述，目前缺乏一种快速、便捷、准确的现场测定方法和装备。本专利描述的是一种基于核酸分子放大技术的样品中细菌的特异性、自动化、可携带式定量检测装置。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有技术中测量速度较慢、不便捷、结果不准确的问题，提供一种新的迅速测量油田污水和成品油中细菌含量的方法。该方法具有快速、便捷、准确的优点。