[发明专利]一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法有效
| 申请号： | 201610164067.8 | 申请日： | 2016-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN105734133B | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 程起群;逄娇慧;全为民;吕浩;徐亚岩 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 线粒体 特异 片段 牡蛎 熊本 鉴定 方法 | ||
1.一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法，包括：
(1)提取近江牡蛎和熊本牡蛎的基因组DNA；
(2)利用上游引物和下游引物对步骤(1)中的基因组DNA进行PCR扩增，得到目的片段的PCR产物；其中，上游引物为5’-GTTCCGTTCCATCCTTAT-3’，下游引物为5’-AGACCACTTATCCCTCCA-3’；
(3)将步骤(2)中的PCR产物直接进行凝胶电泳，根据得到的条带初步判断两个物种的有无，进一步结合测序结果鉴别这两个物种的类别；PCR产物条带中近江牡蛎的目的片段为1506±2bp，熊本牡蛎目的片段为1576±2bp，两者相差70±4bp。
2.根据权利要求1所述的一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中基因组DNA为近江牡蛎和熊本牡蛎肌肉组织中总基因组DNA；提取方法为酚-氯仿法提取。
3.根据权利要求1所述的一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR反应体系包括以下成分：100ngDNA模板，dNTPs终浓度0.2mmol/L，引物终浓度各0.4umol/L，MgCl2终浓度2.0mmol/L，12.5μL 2×reactionbuffer，1.25U Taq聚合酶，然后加去离子水至终体积25μL。
4.根据权利要求1所述的一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增程序如下：94℃预变性5min；接下来为37个循环，每个循环包括94℃变性45s，53℃退火45s，72℃延伸1min；最后72℃延伸8min。
5.根据权利要求1所述的一种基于线粒体特异片段的近江牡蛎和熊本牡蛎的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中凝胶电泳为1.4％的琼脂糖凝胶电泳。
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