[发明专利]一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法

权利要求书

1.一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，包括以下步骤：

A、收集裸鼹鼠大脑皮层混合细胞：

分离出生1-7天裸鼹鼠大脑皮层组织，将组织剪碎，加入组织消化液混匀之后，将其放入三气培养箱中消化；然后加入混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，将细胞沉淀重悬并吹打成单细胞悬液并种于培养瓶中；

B、裸鼹鼠大脑皮层混合细胞的培养：

将步骤A得到的混合细胞，用混合神经细胞培养基于三气培养箱中培养30--45天；自混合细胞接种之后，每10天采取半量换液的方法更换混合神经细胞培养基；

C、裸鼹鼠小胶质细胞的分离及纯化培养：

将步骤B中培养的混合细胞恒温震荡培养4小时，震荡培养过程中保持培养瓶口旋紧以减少瓶内外空气交换，恒温35±2℃，将震荡培养的细胞悬液置于未包被有左旋多聚赖氨酸的培养皿中使细胞贴壁10分钟以上，去除细胞上清，更换新鲜的混合神经细胞培养基中继续培养；

待到对小胶质细胞功能研究时，提前20-40分钟更换为小胶质细胞培养基于三气培养箱中进行培养；

所述的小胶质细胞培养基，为添加体积百分数为2％B27的Neurobasal；

所述的三气培养箱的参数设置为：温度控制在35±2℃，氧浓度为5％，二氧化碳浓度为5±1％，湿度为96±2％。

2.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤A中，所述的组织消化液为质量浓度0.25％胰酶和浓度为0.1mg/ml DNA酶I的混合液。

3.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，所述的混合神经细胞培养基为含有体积百分数10％胎牛血清的低糖DMEM。

4.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤A中，取出生1-7天裸鼹鼠大脑，剥除脑膜后分离皮层组织，用显微剪将组织剪碎至1mm³，加入组织消化液混匀之后，将其放入三气培养箱中消化；消化条件为37℃下消化30分钟。

5.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤A中，所述离心参数为室温条件下500rpm，5分钟。

6.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤B中，用混合 神经细胞培养基培养于三气培养箱中培养42天。

7.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤C中，细胞贴壁时间为15分钟。

8.根据权利要求1所述的一种裸鼹鼠小胶质细胞培养方法，其特征在于，步骤C中，恒温震荡培养使用的恒温摇床其主要参数设置为：温度为35℃，转速为150rpm。