[发明专利]一种茶枯多糖提取工艺

说明书

【技术领域】

本发明涉及医药保健领域，具体地涉及一种茶枯多糖提取工艺。

【背景技术】

近年来，多糖在抗衰老、降血脂等方面的应用上有很大的发展。茶籽压榨后副产物即茶枯中含有丰富的生物活性物质，茶枯多糖即是其中之一。茶枯多糖具有很好的自由基清除能力和抗氧化能力，倍受研究人员和消费者的青睐；茶枯多糖的调节血糖、抗血栓、调节免疫等功能也越来越受到重视，对茶枯多糖提取工艺的研究也越来越全面、深入。

在现有的水提法提取茶枯多糖工艺中，由于提取过程中不可避免的会有蛋白质残留其中，且蛋白质杂质的存在会影响茶枯多糖的抗氧化性，为了提取到更纯的茶枯多糖，工艺中设置去蛋白工序，采用向茶枯多糖粗提液中添加三氯乙酸(TCA)溶液促使蛋白质变性沉降而达到去除蛋白质杂质的目的，即可得到较纯的多糖。但是由于茶枯多糖大多以糖蛋白的形式存在，采用添加TCA处理变性沉淀蛋白质杂质的同时，茶枯多糖会也会随着蛋白质一起被沉降下来，造成茶枯多糖的大量损失。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有茶枯多糖提取工艺中会损失大量多糖的技术缺陷，提供一种降低多糖损耗的茶枯多糖提取工艺。

为实现上述目的，本发明提供的茶枯多糖提取工艺，其特征在于包括如下步骤：

1)、将茶枯置于60℃烘箱内干燥8-10小时后粉碎，过60目筛；

2)、取茶枯粉末，加入20倍质量的蒸馏水，将混浊液置于40000Hz超声波中处理20min后，放置于70℃水浴中2小时，不时振摇；

3)、将水浴后的混浊液4000r/min离心分离10min，取上清液加入3倍体积无水乙醇置于4℃静置2小时,4000r/min离心10min，收集并清洗沉淀；

4)、将清洗后的沉淀加入与步骤2)相同量的蒸馏水重新溶解，即为茶枯多糖粗提液，调节pH值，然后向溶液加入一定酶活的蛋白酶，设定温度和时间进行酶解处理；

5)、向酶解处理后的溶液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，20℃静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，收集上清液，即为茶枯多糖提取液；

6)、干燥，即得到茶枯多糖。

优选地，步骤4)中所述的pH值为9.0，所述的蛋白酶为蛋白酶A，酶活为250U/mg，加入酶后酶的质量与体系的体积比为0.009g:100mL，反应时间50min，反应温度为37℃。

运用本发明工艺提取茶枯多糖，由于在采用TCA沉淀蛋白质之前，采用生物酶法对茶枯多糖粗提液进行了预处理，最大化地使多糖和所连接的蛋白质分离开了，所以后续采用TCA沉淀蛋白质的过程中，也就最大化地减少了茶枯多糖的损耗，提高了得率。

【附图说明】

图1为酶添加量对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；

图2为酶解时间对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；

图3为酶的作用温度对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；

图4为酶的作用pH值对茶枯多糖得率及损耗率的影响图。

【具体实施方式】

现结合实施例详细说明本发明的技术方案。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实验材料：茶枯，实验前60℃烘干后粉碎，过60目筛备用。

实验试剂：蛋白酶A、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、链霉蛋白酶、无水乙醇、浓硫酸、苯酚、TCA、考马氏亮蓝G-250(称取考马氏亮蓝G-25050mg，加体积百分比浓度为95％乙醇25ml溶解，加体积百分比浓度为85％磷酸50ml，H₂O定容到500ml，过滤去除少量未溶解物，4℃保存备用)。

仪器设备：粉碎磨、标准检验筛(规格90目)、电热恒温干燥箱、电子天平、超声波清洗器、数显恒温水浴锅、pH计、紫外线可见分光光度计、电热套、台式高速冷冻离心机。

茶枯多糖含量的测定：采用蒽酮-硫酸法测定多糖含量。

茶枯多糖得率＝蒽酮-硫酸法计算出的茶枯多糖质量(g)/原料茶枯质量(g)×100％

茶枯多糖损耗率＝(加酶液处理前茶枯多糖得率-加酶液处理后茶枯多糖得率)/加酶液

处理前茶枯多糖得率×100％

茶枯多糖纯度＝蒽酮-硫酸法计算出的茶枯多糖质量(g)/干燥后得到的茶枯多糖产品质