[发明专利]一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中提取溶菌酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中提取溶菌酶的方法，属于生物技 术领域。

背景技术

溶菌酶是一种碱性蛋白质，其广泛分布于动物、植物和微生物中，在哺 乳动物的血浆、气管、肠道、胃、肾和肝等组织细胞中均有所表达。溶菌酶 由于具有抗菌性，并且无毒、副作用，可作为潜在的抗生素替代品运用于食 品、生物工程、医疗和畜禽饲料等领域。

目前溶菌酶的制备方法主要有直接结晶法、离子交换法、超滤法、聚电 解质沉淀法、亲和层析法等。直接结晶法的操作简便，但生产周期长、收率 低，纯度和活性也低，不适合工业化生产；超滤法的操作简单，无杂质引入， 但是提取方法粗放，产品质量差，且超滤膜容易堵塞；聚电解质沉淀法的生 产周期长，提取过程中引入的试剂具有不安全因素，产品不适用于食品医药 等领域；亲和层析法可快速的实现目的物与其他杂质的分离，但是溶液粘度 大时容易造成层析柱的堵塞。目前工业生产主要采用阳离子交换法，通过阳 离子树脂吸附、高盐洗脱、脱盐脱水和雾化干燥等步骤获得较为理想的收率 和纯度。由于溶菌酶洗脱液溶液量大、含盐量高，常用超滤设备负担重、超 滤膜因长时间工作易受污染，膜的使用寿命受到很大的影响；同时蛋清中的 大部分蛋白质被破坏，致使无法进行蛋清蛋白的后续加工应用。

鸡蛋中含有多种具有生物活性的蛋白质，如溶菌酶的抗菌活性、卵转铁 蛋白结合铁的特性、卵粘蛋白的抗病毒活性，以及卵黄素蛋白结合核黄素的 活性，这些重要的生物活性已经引起广大科研工作者的强烈关注。上述方法 都不利于共分离制备鸡蛋清中的卵白蛋白、卵转铁蛋白等其它活性蛋白。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中 提取溶菌酶的方法。本发明的方法所用工艺简单快捷，条件温和，无需复杂 设备，可以获得高纯度与高生物活性的溶菌酶，可以克服现有溶菌酶制备工 艺的缺点，而且在制备溶菌酶的同时还可以获得较高纯度的其它活性蛋白。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从鸡蛋清或全鸡蛋液中 提取溶菌酶的方法，包括如下步骤：

(1)鸡蛋清或全鸡蛋液加1～10倍重量水，混合均匀，过滤，除去杂 质，得到稀释液；

(2)将步骤(1)得到的稀释液用超滤膜超滤，得到稀液和浓液；

(3)在步骤(2)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的 重量比例为1:3～1:8，得到吸附后的树脂；

(4)将步骤(3)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/LNaCl水溶 液进行洗脱，得到洗脱液；

(5)将步骤(4)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液；

(6)将步骤(5)得到的超滤液干燥后，即得到所述溶菌酶。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，步骤(1)所述过滤为滤布过滤或纱布过滤。杂质，主要为蛋 黄中的脂类成分，是鸡蛋清或全鸡蛋液加水混合后出现的不溶性颗粒。

进一步，步骤(2)所述超滤膜的截留分子量为15000～30000Da。

进一步，步骤(2)所述浓液经干燥后得到高分子蛋白。

进一步，所述高分子蛋白用来制备卵白蛋白、卵转铁蛋白、卵粘蛋白以 及卵黄素蛋白。

进一步，步骤(3)所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂。

进一步，所述阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、 Dowex-50、Lewatit-100、DiaionSK-1、AllassionCS、DuoliteC-20、SDB-3 中的一种，所述大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、 S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。

进一步，步骤(5)所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da。

进一步，步骤(6)所述干燥为喷雾干燥、低温真空干燥或冷冻干燥。

上述步骤(1)，采用水代替酸液或盐溶液进行鸡蛋清或鸡蛋液稀释， 降低了成本，同时又减少了稀释液系统中的盐含量，减少了后续工艺脱盐的 压力，亦有利于鸡蛋清或鸡蛋液中其它蛋白的回收。

上述步骤(2)，采用超滤，是为了分离制备大分子蛋白，既提高了经 济效益，又降低了溶菌酶提取液的粘度，使后续的吸附更易进行。