[发明专利]肉鸭细小病毒精制卵黄抗体

权利要求书

1.肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于，其制备流程包括以下：

第一步，将分离得到的肉鸭细小病毒经易感鸭胚传代12代获得作为毒种， 然后将得到的肉鸭细小病毒用生理盐水20000倍稀释，经尿囊腔接种11日 龄易感鸭胚，0.1ml/胚，收集接种60～120小时死亡鸭胚尿囊液，无菌检验 合格后得到抗原；

第二步，抗原加终浓度为0.1％甲醛，37℃灭活24小时；于4℃经4000转/ 分钟离心30分钟，收集上清液，上清液用超滤器浓缩15倍，浓缩液转入 灭菌容器灭活检验合格后得到制备疫苗用抗原制备疫苗用抗原加入鸭白细 胞介素2，使鸭白细胞介素2终浓度为5μg/ml，即为鸭细小病毒白细胞介素 2佐剂灭活疫苗，无菌操作分装，于2～8℃保存；

第三步，选取商品蛋鸡进行抗原接种和收集高免鸡蛋，对高免鸡蛋进行消 毒、分离卵黄、抗体的萃取和过滤。

2.根据权利要求1所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：所述 第一步中得到的抗原，要进行病毒含量、纯净性、特异性和免疫原性进行鉴定。

3.根据权利要求2所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：抗原 用生理盐水10倍系列稀释，取10^-5、10^-6和10^-73个稀释度接种9日龄易感鸭胚， 每个稀释度各接种5枚，每一胚胎0.1ml，用蜡封孔，于37.5℃静置孵化，24 小时以前死亡的鸭胚弃去不计，收集24～168小时死亡鸭胚，按Reed-Muench 法计算病毒含量为10^-6.25ELD₅₀/0.1ml。

4.根据权利要求2所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：所述 免疫原性按如下进行免疫接种：

对100～110日龄商品蛋30只进行接种，同时设10只对照，不做任何处理， 免疫程序如下：

基础免疫每只鸡腿部肌肉注射1.0ml；

加强免疫在基础免疫后21日进行第2次接种，每只鸡胸部肌肉注射 1.5ml；

强化免疫在加强免疫后15日进行第3次接种，每只鸡颈背部皮下注射 2.0ml。

5.根据权利要求4所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：选取 100-120日龄蛋鸡进行灭火抗原接种：维持免疫：当卵黄中鸭细小病毒琼扩抗体 效价临界1:32时，维持接种1次，每只鸡颈背部皮下注射疫苗2.0ml。强化免疫 后7日，抽样取蛋，分离卵黄，提取抗体，检测鸭细小病毒琼扩抗体效价大于 等于1:32为合格，收集高免鸡蛋，8～12℃贮存，应不超过10日。

6.根据权利要求1所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：充分 搅拌使卵黄呈均匀膏状，装入灭菌搅拌罐中，按体积比1:3加入25℃左右、PH 为4.7的灭菌注射用水，搅拌30分钟，将卵黄液转入不锈钢桶中，加入终浓度 为4％正辛酸，继续搅拌30分钟，室温放置12～24小时，用40目滤网撇去漂 浮在上层的蛋黄，用80目滤布过滤，收集滤液，滤出液和下层液体合并，用板 框过滤器加滤板和0.4微米滤膜过滤，然后转入用0.2％甲醛溶液消毒的500L冰 柜中，4℃冷藏5小时，使残留的辛酸结晶凝结析出，用80目滤网撇去浮在上 层的辛酸结晶，用0.2M氢氧化钠溶液调pH7.0，再后用磷酸氢二钠-磷酸二氢钠 缓冲液调节pH6.9，即为抗体半成品。

7.根据权利要求7所述的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，其特征在于：抗体 半成品加入终浓度0.05％甲醛，用过滤精度0.2μm的筒式滤芯过滤除菌。