[发明专利]肉鸭细小病毒精制卵黄抗体

说明书

技术领域

本发明涉及一种肉鸭细小病毒精制卵黄抗体，主要涉及抗体领域。

背景技术

2014年11月以来，我国部分地区肉鸭流行一种以临床症状为鸭喙发育不良， 舌头外露、肿胀、向下弯曲，发病率为10-30％，鸭发病日龄集中在2个阶段， 第一阶段为3～13日龄，症状为站立不稳，蹼外翻，强行驱赶时跛行或翻滚； 第二阶段为21～28日龄，主要为运动障碍，跟不上大群，呈蹲坐式或侧卧，并 表现出舌头外露症状，患病鸭料肉比比正常鸭高30％以上，同日龄出栏体重比 正常鸭低20％以上，且发育不整齐，屠宰时易翅膀和腿骨折为特征的疾病。禽 病专家刁有祥等最先分离到病原，基因序列鉴定与鹅细小病毒同源性大于98％， 与番鸭细小病毒同源性为77％左右，命名为鸭细小病毒。常规治疗方法基本无 效，对鸭养殖业造成巨大经济损失。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提出一种的肉鸭细小病毒精制卵黄抗体。

为达到上述目的，本发明的技术方案是：

第一步，将分离得到的肉鸭细小病毒经易感鸭胚传代12代获得作为毒种， 然后将得到的肉鸭细小病毒用生理盐水20000倍稀释，经尿囊腔接种11日 龄易感鸭胚，0.1ml/胚，收集接种60～120小时死亡鸭胚尿囊液，无菌检验 合格后得到抗原；

第二步，抗原加终浓度为0.1％甲醛，37℃灭活24小时；于4℃经4000转/ 分钟离心30分钟，收集上清液，上清液用超滤器浓缩15倍，浓缩液转入 灭菌容器灭活检验合格后得到制备疫苗用抗原制备疫苗用抗原加入鸭白细 胞介素2，使鸭白细胞介素2终浓度为5μg/ml，即为鸭细小病毒白细胞介素 2佐剂灭活疫苗，无菌操作分装，于2～8℃保存；

第三步，选取商品蛋鸡进行抗原接种和收集高免鸡蛋，对高免鸡蛋进行消 毒、分离卵黄、抗体的萃取和过滤。

进一步，第一步中得到的抗原，要进行病毒含量、纯净性、特异性和免疫 原性进行鉴定。

进一步，抗原用生理盐水10倍系列稀释，取10^-5、10^-6和10^-73个稀释度接 种9日龄易感鸭胚，每个稀释度各接种5枚，每一胚胎0.1ml，用蜡封孔，于37.5℃ 静置孵化，24小时以前死亡的鸭胚弃去不计，收集24～168小时死亡鸭胚，按 Reed-Muench法计算病毒含量为10^-6.25ELD₅₀/0.1ml。

进一步，免疫原性按如下进行免疫接种：

对100～110日龄商品蛋30只进行接种，同时设10只对照，不做任何处理， 免疫程序如下：

基础免疫每只鸡腿部肌肉注射1.0ml。

加强免疫在基础免疫后21日进行第2次接种，每只鸡胸部肌肉注射 1.5ml。

强化免疫在加强免疫后15日进行第3次接种，每只鸡颈背部皮下注射 2.0ml。

进一步，选取100-120日龄蛋鸡进行灭火抗原接种：维持免疫：当卵黄中鸭 细小病毒琼扩抗体效价临界1:32时，维持接种1次，每只鸡颈背部皮下注射疫 苗2.0ml。强化免疫后7日，抽样取蛋，分离卵黄，提取抗体，检测鸭细小病毒 琼扩抗体效价大于等于1:32为合格，收集高免鸡蛋，8～12℃贮存，应不超过 10日。

进一步，充分搅拌使卵黄呈均匀膏状，装入灭菌搅拌罐中，按体积比1:3加 入25℃左右、pH为4.7的灭菌注射用水，搅拌30分钟，将卵黄液转入不锈钢 桶中，加入终浓度为4％正辛酸，继续搅拌30分钟，室温放置12～24小时，用 40目滤网撇去漂浮在上层的蛋黄，用80目滤布过滤，收集滤液，滤出液和下层 液体合并，用板框过滤器加滤板和0.4微米滤膜过滤，然后转入用0.2％甲醛溶 液消毒的500L冰柜中，4℃冷藏5小时，使残留的辛酸结晶凝结析出，用80目 滤网撇去浮在上层的辛酸结晶，用0.2M氢氧化钠溶液调pH7.0，再后用磷酸氢 二钠-磷酸二氢钠缓冲液调节pH6.9，即为抗体半成品。

进一步，抗体半成品加入终浓度0.05％甲醛，用过滤精度0.2μm的筒式滤 芯过滤除菌。