[发明专利]氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌检测用标准样品及制法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检验检疫领域，特别是金黄色葡萄球菌检测用标准样品。

背景技术

食品安全是重大公共卫生问题，是制约我国经济发展的重要因素。而微生物污染 造成的食源性疾病，是我国食品安全中最突出的问题。近年来，随着食品产业结构的调整、 经济全球化与国际贸易的迅速发展，我国食源性疾病的防控面临一系列新问题和挑战。

抗菌药物敏感性试验（antimicrobialsusceptibilitytest，AST）是细菌耐药性 监测和流行病学调查及耐药机制研究的重要手段，包括纸片扩散法、肉汤/琼脂稀释法、自 动化仪器检测法、E-test法等。纸片扩散法师临床实验室应用较为广泛的一种方法，WHO推 荐的纸片扩散法是K-B法（改良Kirby-Bauer法），美国临床实验室标准化委员会（CLSI）每年 都根据新的研究结果对其标准进行补充修正，目前NCCLS/CLSI标准在世界上影响最广。

目前，国内主要采用纸片扩散法对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌耐药性进行检测， 但对于产ESBLs的大肠杆菌检测比较特殊，用于检测ESBLs的方法主要有：双纸片协同扩散 法（double-disksynergytest,DDS）、酶抑制剂增强的纸片扩散法（inhibitor- potentiateddiscdiffusiontest），酶抑制剂增强的肉汤稀释法（inhibitor potentiatedbrothdilutedtest,IPBDT）、三维测试法（three-dimensionaltests, TD）、头孢硝唾吩竞争分析试验（nitrocefincompetitionassayNCA），Etest法和Vitek测 试法等。这些主要原理是ESBLs水解第三代头抱菌素的活性可被酶抑制剂所抑制的检测方 法，适用于肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌中ESBLs的检测，是目前检测ESBLs的 标准方法。目前所采用的SN/T1944-2007《动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法》 检测标准，主要是基于CLSI所推荐的方法及耐药折点对细菌进行判读是否耐药。

发明内容

本发明的目的是克服目前食品中致病菌耐药性标准样品紧缺的状况，根据实际工 作的需要和国内现状开展了食品中致病菌耐药性标准样品的研制，均匀性和稳定性良好， 符合检验检疫要求，提高检验检疫水平和效率。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌 检测用标准样品，样品含有冻干的细菌混合物与冻干保护剂，采用西林瓶真空包装，其中细 菌混合物包括氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌。

所述标准样品每瓶装样量为1克，平均每份样品中含有2.0-4.0×10⁶cfu目标菌。

本发明氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌检测用标准样品的制法：具体过程如 下：

第一步菌株活化、增菌培养及纯化：

所用标准菌株来源于美国标准菌种收藏所（AmericanTypeCultureCollection），标 准菌株号ATCC51329，氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌标准菌株进行菌株活化、增菌培 养，进行生化鉴定和药敏试验；

第二步样品制备：

采用真空冷冻干燥方式制备，将灭菌蒸馏水中加入保护剂，再次煮沸灭菌；冷却后加入 活化的红霉素耐药性金黄色葡萄球菌，混匀；分装至无菌干燥西林瓶中，真空冷冻干燥；

第三步细菌鉴定及耐药性测定：

取制备的标准样品进行鉴定，经采用生化鉴定和药敏试验分析，确认所制备的标准样 品为氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌标准样品；

第四步均匀性试验：

采用在基体中添加氨基糖苷类耐药性金黄色葡萄球菌形成大样，然后充分混匀并分装 的方法制备100份标准样品；根据以往的研究结果，在充分混匀的大样中目标菌服从泊松分 布，大样中目标菌添加量为2.0-4.0×10⁸cfu，平均每份样品中含有2.0-4.0×10⁶cfu目标 菌；按照泊松分布计算，每个样品中含有2.0-4.0×10⁶cfu目标菌的概率为99.81%；每瓶 样品中的目标菌量被控制在2.0-4.0×10⁶cfu之间，样品的均匀性得以保证；

第五步稳定性试验：