[发明专利]以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法

权利要求书

1.一种以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法，其特征在于：包 括以下步骤：

(1)挑取成熟饱满的种子，去壳得籽粒，将籽粒做消毒处理，再转接到无 激素的MS基础培养基上黑暗环境下恒温培养至种子萌发，获得无菌苗；

(2)取无菌苗，切去胚芽和下胚轴，分开子叶，每半片子叶横切，获得子 叶节外植体；

(3)将子叶节外植体接种于不定芽诱导培养基MS1中培养，期间定期更 换培养基，获得不定芽簇；

(4)将不定芽簇从外植体上剥离，转接至继代培养基MS2中，继续培养， 期间定期更换培养基，待不定芽长到3-4cm高时，分开不定芽簇，获得单个不 定芽苗；

(5)将单个不定芽苗转接至生根培养基MS3中，培养至生根；

(6)将生根的再生植株进行炼苗处理；

(7)炼苗完成后，取出再生苗，洗去根部培养基，移栽于育苗基质中，放 于温室培养。

2.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(1)中对籽粒消毒处理的方法为，先用体积含量为70％的 无水乙醇对籽粒表面消毒35-45S，用无菌水冲洗2-3次，再用质量浓度为10％ 的NaClO消毒8-12min，再用无菌水冲洗2-3次，最后置于无菌滤纸上控干水分。

3.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(2)中选取萌发3d的无菌苗。

4.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(3)中不定芽诱导培养基MS1包括：MS培养基、3.0mg·L^-1 的6-BA、0.01mg·L^-1的2,4-D、0.3mg·L^-1的AgNO₃、30g·L^-1的蔗糖和8g·L^-1的琼脂，不定芽诱导培养基MS1的pH为5.6-6.0。

5.根据权利要求4所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(3)中子叶节外植体在不定芽诱导培养基MS1中培养时间 为3-4周，培养条件为：培养温度为25℃、16h光照与8h黑暗交替处理、3000Lux 光照，并每10d更换一次培养基。

6.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(4)中培养时间为2-3周，更换培养基的频率为每10d更换 一次培养基。

7.根据权利要求6所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(4)中继代培养基MS2包括：MS培养基、3.0mg·L^-1的6-BA、 0.01mg·L^-1的2,4-D、0.3mg·L^-1的AgNO₃、30g·L^-1的蔗糖和8g·L^-1的琼脂， 继代培养基MS2的pH为5.6-6.0。

8.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(5)中生根培养基MS3包括：MS培养基、0.05mg·L^-1的 NAA、30g·L^-1的蔗糖和8g·L-1琼脂，生根培养基MS3的pH为5.6-6.0， 培养至生根的时间为2周。

9.根据权利要求1所述的以子叶节为外植体建立葫芦高效再生体系的方法， 其特征在于：步骤(6)中待再生植株根长到2cm长、再生苗长到5-6cm高时， 打开组培瓶盖，进行练苗处理。