[发明专利]一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱及其建立方法和应用

权利要求书

1.一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱的建立方法，

其特征在于，包含如下步骤：

S1. 精密称取多枝雾水葛药材，制备得到供试品溶液；

S2. 将供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到指纹图谱；

步骤S2中高效液相色谱仪分析的色谱条件为：采用ACQUITY UPLC BEH SHIELD RP18色谱柱；以乙腈-0.2%甲酸水为流动相进行梯度洗脱；流速为0.2~0.5mL/min，检测波长为30~330nm；进样量为0.2~10µl；

梯度洗脱条件为：0～22min，乙腈的体积分数变化为15%~19%；22～26min，乙腈的体积分数变化为19%~24%；26～32min，乙腈的体积分数变化为24%~24%；32～40min，乙腈的体积分数变化为24%~38%；

所述的供试品溶液通过包含如下步骤的方法制备得到：

S11. 称取多枝雾水葛药材，加入5~15倍量石油醚回流提取1~5次，每次0.5~3h，滤过，弃去石油醚提取液，得滤渣；

S12. 将滤渣用5~15倍量乙醇回流提取1~5次，每次0.5~3h，滤过，合并滤液，浓缩至无醇味，加水溶解、离心，取上清液加水调整浓度至0.1~0.5g生药/ml并调节pH至4.5~5.5，得样品溶液；

S13. 吸取步骤S12制备得到的样品溶液，用AB-8大孔树脂柱富集总黄酮，上样流速0.5~3BV/h，上样完毕后，用1~5 BV的水洗脱除杂，再用2~5BV体积分数为50~70%的乙醇以1~3 BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，用滤膜滤过，得供试品溶液。

2.根据权利要求1所述的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，选自如下的A~M项中的任意一项或者多项：

A．步骤S11.中，加入8~12倍量石油醚；

B．步骤S11.中，回流提取2~4次；

C．步骤S11.中，每次回流提取的时间为0.5~2h；

D．步骤S12.中，加入8~12倍量乙醇；

E． 步骤S12.中，乙醇的体积分数为50~95%；

F．步骤S12.中，回流提取2~4次；

G．步骤S12.中，每次回流提取的时间为0.5~2h；

H．步骤S12.中，离心的时间为5~50min，转速1500~5000rpm；

I． 步骤S12.中，取上清液加水调整浓度至0.2~0.4g生药/ml；

J． 步骤S12.中，调节pH至4.5、4.8、5.0、5.2或5.5；

K． 步骤S13.中，上样流速为1~3BV/h；

L． 步骤S13.中，用2~4 BV的水洗脱除杂；

M． 步骤S13.中，用2~4BV体积分数为50%、60%或70%的乙醇以1BV/h的流速洗脱。

3.根据权利要求1所述的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S13.中在用AB-8大孔树脂柱富集总黄酮前，精密吸取步骤S12制备得到的样品溶液；在用滤膜滤过前，将收集的乙醇洗脱液用体积分数为50~70%的乙醇定容。

4.根据权利要求1所述的HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤S2中高效液相色谱仪分析的色谱条件为：采用规格为2.1mm×150mm，1.7µm的ACQUITY UPLC BEH SHIELD RP18色谱柱；流速为0.3 mL/min，检测波长为330nm；进样量为0.2µl。

5.一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱，其特征在于，通过权利要求1~4任一项所述的建立方法建立得到。

6.一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的标准HPLC指纹图谱，其特征在于，选自（1）~（2）中的任一项：

（1）使用单批次或多批次多枝雾水葛道地药材并且按照权利要求1至4中任一项所述的建立方法得到的多枝雾水葛药材HPLC指纹图谱 ；

（2）将使用多批次多枝雾水葛道地药材并且按照权利要求1至4中任一项所述的建立方法得到的HPLC 指纹图谱通过平均数法或者中位数法制成对照谱图。

7.权利要求6所述的多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱在鉴别多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的真伪或质量中的应用。