[发明专利]一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱及其建立方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药材检测技术领域，具体涉及一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱及其建立方法和应用。

背景技术

多枝雾水葛(学名：Pouzolzia zeylanica var.microphylla)为荨麻科雾水葛属下的一个变种。亚洲热带地区广布，产于中国云南东南部，广西，广东，福建，江西南部，台湾；具有解毒消炎功效；用于治疗疖疮炎肿。黄酮类成分是多枝雾水葛的有效成分之一。目前，缺乏一种精确的检测多枝雾水葛药材真伪和质量，以及多枝雾水葛总黄酮质量的方法。

中药指纹图谱是指某种(或某产地)中药材或中成药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材或中成药药物特性的共有峰的图谱。指纹图谱从中医整体观念和中药药效来自多种化学物质综合作用的观点出发，能够建立比较客观、整体和多指标的综合评价体系，并通过图谱的整体特征，能够比较全面地反映出中药所含化学成分。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中存在的上述不足，提供一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱。

本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：

一种多枝雾水葛药材或多枝雾水葛总黄酮的HPLC指纹图谱的建立方法，包含如下步骤：

S1.精密称取多枝雾水葛药材，制备得到供试品溶液；

S2.将供试品溶液采用高效液相色谱仪分析，得到指纹图谱。

优选地，所述的供试品溶液通过包含如下步骤的方法制备得到：

S11.称取多枝雾水葛药材，加入5～15倍量(ml/g)石油醚回流提取1～5次，每次0.5～3h，滤过，弃去石油醚提取液，得滤渣；

S12.将滤渣用5～15倍量(ml/g)乙醇回流提取1～5次，每次0.5～3h，滤过，合并滤液，浓缩至无醇味，加水溶解、离心，取上清液加水调整浓度至0.1～0.5g生药/ml并调节pH至4.5～5.5，得样品溶液；

S13.吸取步骤S12制备得到的样品溶液，用AB-8大孔树脂柱富集总黄酮，上样流速0.5～3BV/h，上样完毕后，用1～5BV的水洗脱除杂，在用2～5BV体积分数为50～70％的乙醇以1～3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，用滤膜滤过，得供试品溶液。

优选地，所述的HPLC指纹图谱的建立方法，选自如下的A～M项中的任意一项或者多项：

A.步骤S11.中，加入8～12倍量(例如8、9、10、11或12倍量)石油醚；

B.步骤S11.中，回流提取2～4次(例如2、3或4次)；

C.步骤S11.中，每次回流提取的时间为0.5～2h(例如0.5、1、1.5或2h)；

D.步骤S12.中，加入8～12倍量(例如8、9、10、11或12倍量)乙醇；

E.步骤S12.中，乙醇的体积分数为50～95％(例如50％、60％、70％、80％、90％或95％)；

F.步骤S12.中，回流提取2～4次(例如2、3或4次)；

G.步骤S12.中，每次回流提取的时间为0.5～2h(例如0.5、1、1.5或2h)；

H.步骤S12.中，离心的时间为5～50min，转速1500～5000rpm(例如时间为5～20min，转速为2000～4000rpm；或者时间为10min，转速为3000rpm)；

I.步骤S12.中，取上清液加水调整浓度至0.2～0.4g生药/ml(例如0.2、0.3或0.4g生药/ml)；

J.步骤S12.中，调节pH至4.5、4.8、5.0、5.2或5.5。

K.步骤S13.中，上样流速为1～3BV/h(例如1BV/h、2BV/h或3BV/h)；

L.步骤S13.中，用2～4BV(例如2BV、3BV或4BV)的水洗脱除杂；

M.步骤S13.中，用2～4BV(例如2BV、3BV或4BV)体积分数为50％、60％或70％的乙醇以1BV/h或1BV/h的流速洗脱。

上述的倍量表示每克多枝雾水葛药材中加入石油醚或乙醇的毫升数。

上述的单位1BV为体积单位，表示体积相当于1倍大孔树脂柱体积。

优选地，步骤S13.中在用AB-8大孔树脂柱富集总黄酮前，精密吸取步骤S12制备得到的样品溶液；在用滤膜滤过前，将收集乙醇洗脱液，用体积分数为50～70％(例如50％、60％或70％)的乙醇定容。