[发明专利]一种提高牙鲆有丝分裂雌核发育双单倍体诱导效率的方法

权利要求书

1.一种提高牙鲆有丝分裂雌核发育双单倍体诱导效率的方法，其特征在于，在进行有丝分裂雌核发育诱导之前，先进行纯合度的鉴定和筛选：使用微卫星标记对母本进行纯合度的鉴定，并筛选母本进行双单倍体的雌核发育诱导。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用覆盖牙鲆24个染色体的24个微卫星标记对雌性亲鱼的纯合度进行鉴定。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、纯合度的鉴定和筛选；

B、精子和卵子的采集：采集牙鲆雌鱼卵子和雄性真鲷精子；

C、精子灭活：用Ringer’s液对精子进行稀释，随后用紫外线进行照射灭活；

D、人工授精：将卵子和灭活后的精子混匀，并激活孵化；

E、诱导双单倍体：孵化完成后，对步骤D中得到的精卵混合物进行静水压处理，处理结束后，将卵子转移至孵化缸孵化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤E诱导双单倍体之后，还包括纯合度检验：用微卫星引物对有丝分裂雌核发育诱导所获得的个体进行纯合度检验。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤B精子和卵子的采集中，挤压筛选得到的雌性牙鲆，将卵子挤入烧杯中，避光保存备用；挤压筛选得到的雄性真鲷，将精液挤入注射器中，显微镜检查精子活力，并对精子进行筛选备用。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤C精子灭活中，用海水鱼用Ringer’s液对精子进行稀释，精子和海水鱼用Ringer’s液的质量比为1:40；稀释后用紫外线对精子进行照射，照射剂量为73mJ/cm²；照射后的精子避光保存，并在显微镜下检查筛选备用。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤D人工授精中，将卵子和灭活后的精子混匀，用17℃的过滤海水激活，并在17℃的孵化箱内孵化60min。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤E诱导双单倍体中，孵化完成后，对步骤D中得到的精卵混合物进行650kg/cm²的静水压处理6min；处理结束后，将精卵混合物转移至孵化缸，流水孵化；并统计受精率和孵化率。