[发明专利]水蜜桃果实ICE1基因、其克隆方法及应用

权利要求书

1.一种水蜜桃果实ICE1基因，其特征在于该基因为SEQIDNO.1所示的碱基序列。

2.一种根据权利要求1所述的水蜜桃果实ICE1基因的编码蛋白，其特征在于该编码蛋 白为SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。

3.一种载体，其特征在于该载体含有根据权利要求1所述的水蜜桃果实ICE1基因。

4.一种重组质粒，其特征在于该质粒含有根据权利要求3所述的载体。

5.一种根据权利要求1所述的水蜜桃果实ICE1基因的克隆方法，其特征在于该方法的 具体步骤为：

a.以苹果ICE1，即ABS50251为探针，在NCBI中对桃基因组数据库进行BLAST搜索，检索 出一条具有完整开放阅读框的核甘酸序列XM_007209914，即为预测的桃ICE1基因序列；

b.提取水蜜桃果实总RNA，然后反转录获取cDNA第一链;根据预测的桃ICE1序列XM_ 007209914设计扩增ICE1基因的上游引物S1和下游引物S2；再以所述反转录获得的cDNA为 模板，进行聚合酶链式PCR反应，即得到水蜜桃果实ICE1基因；

所述的上游引物S1为：5’-TGGGCTCTCTGTCTACCT-3’；

所述的下游引物S2：5’-ACGACTCCCGTCTTTGGT-3’。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的PCR反应的反应体系为：2×高保真 PCRMix15μL，模板1μL，上下游引物各1μL，加ddH₂O至30μL；所述的PCR反应的反应条件为： 94℃预变性4min；94℃变性30s，47℃退火30s，68℃延伸3min，35个循环；68℃再延伸10min。

7.一种根据权利要求1所述的水蜜桃果实ICE1基因在农杆菌介导的花序浸染法转化拟 南芥中的应用。