[发明专利]一种单链抗体及其在肿瘤治疗中的应用

说明书

本发明提供了一种单链抗体及其在肿瘤治疗中的应用。具体地，本发明提供了一种单链抗体、含有所述单链抗体的融合蛋白、含有所述单链抗体的嵌合抗原受体及其相关应用。所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.:2所示，采用本发明的含有所述单链抗体的嵌合抗原受体修饰的T细胞对肿瘤细胞有很好的杀伤效果，脱靶毒性低，可以用于实体肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及一种单链抗体及其在肿瘤治疗中的应用。

背景技术

在国际上，一种新型的过继细胞免疫治疗技术异军突起，这就是应用嵌合抗原受体基因修饰的T细胞过继性地靶向性治疗肿瘤的研究，该研究在临床上取得了非常显著的进展。最为代表性的是以CD19为靶向的CAR-T细胞治疗CD19阳性的B细胞白血病和淋巴瘤的基础和临床研究。June等发表在NEJM的报道显示：应用CD19CAR-T细胞治疗难治、复发性急性淋巴白血病患者取得显著的效果，完全缓解率高达90％以上。

目前，全球至少有20多个研究小组在进行此临床治疗研究。但是，在实体肿瘤的治疗方面，CAR-T细胞显现出有限的治疗效果。主要有以下几个原因：(1)靶抗原在正常组织中表达，脱靶毒性是CAR-T细胞治疗实体肿瘤的主要障碍。(2)由于肿瘤的异质性使CAR-T只能产生短暂的肿瘤消退，因为最后靶抗原阴性的肿瘤细胞将占优势。(3)最重要的是，由肿瘤细胞分泌的免疫抑制细胞因子同调节性T细胞和肿瘤相关巨噬细胞等抑制性细胞在肿瘤细胞周围形成的免疫抑制微环境显著抑制了CAR-T细胞的归巢能力。

因此，本领域迫切需要开发能够应用于实体肿瘤治疗的CAR-T细胞治疗方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种单链抗体及其在肿瘤治疗中的应用。

在本发明的第一方面，提供了一种单链抗体，所述抗体的氨基酸序列如SEQ IDNO.:2所示。

在本发明的第二方面，提供了一种融合蛋白，所述的融合蛋白中含有本发明第一方面所述的单链抗体作为融合蛋白的构成元件。

在另一优选例中，所述的融合蛋白还含有选自下组的构成元件：

(a)抗体的恒定区；

(b)CD28的跨膜结构域；

(c)CD137元件(即4-1BB)；

(d)CD3ζ的胞内信号结构域。

在另一优选例中，所述的跨膜结构域为CD28的跨膜结构域。

在另一优选例中，所述的融合蛋白在其N端具有信号肽元件。

在另一优选例中，所述的融合蛋白在抗体的恒定区与CD28的跨膜结构域之间还设有抗体的铰链区。

在另一优选例中，所述的抗体的铰链区为IgD的抗体铰链区。

在另一优选例中，所述的融合蛋白为嵌合抗原受体。

在另一优选例中，所述嵌合抗原受体从N端至C端，依次具有以下元件：

任选的信号肽元件－本发明第一方面所述的单链抗体－抗体的恒定区－CD28的跨膜结构域－CD137元件(4-1BB)－CD3ζ的胞内信号结构域。

在本发明的第三方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体的胞外结构域为氨基酸序列如SEQ ID NO.:2所示的单链抗体。

在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体还含有以抗体恒定区、抗体的绞链区、CD28跨膜区及CD137和CD3ζ的胞内信号结构域串联而成的结构为信号传导结构域。

在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体从N端至C端，依次具有以下元件：