[发明专利]一种检测基因工程酶活力的方法有效
| 申请号： | 201610176972.5 | 申请日： | 2016-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN105755104A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 王倩;周林;周翠兰;徐惠芬;张安迪;张佳;李凯 | 申请（专利权）人： | 苏州佳章生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/44 | 分类号： | C12Q1/44;C12Q1/06;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 范晴 |
| 地址： | 215163 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 基因工程 活力 方法 | ||
1.一种检测基因工程酶活力的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
(1)选取含有携带lacZ基因的载体，
(2)构建含有双重复片段的载体：将两个重复片段插入到所述的载体中，且将待测核酸酶的靶序列插入两个重复片段之间，所述的两个重复片段的序列完全一致，且所述的两个重复片段为移动报告基因的阅读框架；
(3)将步骤(2)构建的含有基因工程核酸酶与双重复片段的载体进行在含有X-Gal-IPTG的培养基中进行转化，
(4)根据共转化的菌落形成结果对酶活力进行评价。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述载体选自PMD19-T、PMD18-T、CRISPR/Cas9。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述重复片段的长度为10到50个碱基。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述重复片段包括EGFR重复片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.1所示；HBV重复片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.2所示；LoxP重复片段，其核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。
5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述待测核酸酶为血管紧张素原AGT基因。
6.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述待测核酸酶的靶序列片段如SeqIDNo.4或5所示。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中菌落形成结果包括：菌落颜色的蓝色与白色的差异、菌落有无的差异、菌落多少的差异。
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