[发明专利]一种尖吻蝮蛇凝血酶及其制备方法有效
| 申请号： | 201610179525.5 | 申请日： | 2016-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN105586330B | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 邓沁;彭维;王永刚;吴忠 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 广州容大专利代理事务所(普通合伙) 44326 | 代理人： | 刘新年;黄开艳 |
| 地址： | 510275 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蝮蛇 凝血酶 及其 制备 方法 | ||
1.一种尖吻蝮蛇凝血酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)粗品澄清：以浓度为0.01M、pH值为6.5-7.1的磷酸缓冲液，溶解尖吻蝮蛇蛇毒粗品，制成蛇毒溶液，蛇毒溶液经孔径0.45μm的微滤膜过滤，收集滤液；
(2)超滤除杂：将所得滤液经孔径10NMWC超滤膜过滤，收集滤液；
(3)将步骤(2)所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱进行第一次层析，用含有0.05mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为6.2-6.8的磷酸缓冲液洗脱，收集出峰组分，以孔径为10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱进行第二次层析，再分别用含0.03mol/L和0.1mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为7.2-7.8的磷酸缓冲液依次洗脱，收集0.1mol/L的洗脱峰流出液，以孔径10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；
(5)除热原：将步骤(4)所得滤液用Superdex-75pg层析柱，用pH值为7.2-7.8的0.01M磷酸缓冲液层析洗脱，收集出峰组分；
(6)脱盐：将步骤(5)所得滤液用Sepadex-G25层析柱，用注射用水洗脱，对已除热原的上述组分进行脱盐，得到尖吻蝮蛇凝血酶。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)粗品澄清：以浓度为0.01M、pH值6.8的磷酸缓冲液，溶解尖吻蝮蛇蛇
毒粗品，制成蛇毒溶液，蛇毒溶液经孔径0.45μm的微滤膜过滤，收集滤液；
(2)超滤除杂：将所得滤液经孔径10NMWC超滤膜过滤，收集滤液；
(3)将步骤(2)所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱进行第一次层析，用含有0.05mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为6.8的磷酸缓冲液洗脱，洗脱速度10ml/min，收集出峰组分，以孔径为10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；
(4)将步骤(3)所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow层析柱进行第二次层析，再分别用含0.03mol/L和0.1mol/L NaCl，浓度为0.01M，pH值为7.5的磷酸缓冲液依次洗脱，洗脱速度20ml/min，收集0.1mol/L的洗脱峰流出液，以孔径10NMWC超滤膜超滤浓缩，收集滤液；
(5)除热原：将步骤(4)所得滤液使用Superdex-75pg层析柱，用pH值为7.5的0.01M磷酸缓冲液洗脱，洗脱速度20ml/min，收集出峰组分；
(6)脱盐：将步骤(5)所得滤液使用Sepadex-G25层析柱，用注射用水洗脱，洗脱速度20ml/min，对已除热原的上述组分进行脱盐，得到尖吻蝮蛇凝血酶。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中山大学，未经中山大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610179525.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
