[发明专利]一种含有肽键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法和应用在审
| 申请号： | 201610180004.1 | 申请日： | 2016-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN105777910A | 公开（公告）日： | 2016-07-20 |
| 发明（设计）人： | 王立新;沈艳飞;赵金金 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/22;A61K39/00;A61K39/39;A61P35/00 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 郑立发 |
| 地址： | 211189 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 含有 his vx3 egfp 蛋白 纳米 共价 偶联泛素化 及其 提取 方法 应用 | ||
1.一种含有肽键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白，其特征在于，所述泛素化蛋白是由His-Vx3-eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过肽键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白。
2.权利要求1所述的含有肽键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用对羟基苯甲酸，对纳米铝颗粒进行修饰；
(2)将修饰后的纳米铝活化，加入His-Vx3-eGFP蛋白，通过生成肽键形成His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联物；
(3)培养肿瘤细胞，抑制泛素化蛋白的降解，经细胞裂解液处理，离心得上清液；
(4)将步骤(2)所得共价偶联物和步骤(3)所得上清液共孵育，即得所述泛素化蛋白α-Al2O3-His-Vx3-eGFP-Ub。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中所述修饰方法为：纳米铝与对羟基苯甲酸在加热油浴条件下搅拌反应，使对羟基苯甲酸与纳米铝上的羟基反应。
4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述活化方法为：EDC/NHS与对羟基苯甲酸修饰后的纳米铝常温搅拌反应以活化羧基。
5.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中所述His-Vx3-eGFP蛋白是由以下方法制得：
复苏转化了His-Vx3-eGFP表达质粒的大肠杆菌，诱导其表达蛋白，采用镍离子层析法提取所述His-Vx3-eGFP蛋白。
6.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养肿瘤细胞为按照常规方法培养。
7.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中所述抑制泛素化蛋白的降解的方法为：培养的肿瘤细胞生长至80％，加入万珂和氯化铵，加入量分别为(160-240)nmol/L和(25-35)mmol/L，干预肿瘤细胞14-18小时，抑制泛素化蛋白的降解。
8.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，步骤(4)中所述孵育为4℃共孵育过夜。
9.权利要求1所述的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白在制备抗肿瘤疫苗中的应用。
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