[发明专利]一种提高PCR特异性的方法有效
申请号: | 201610180221.0 | 申请日: | 2016-03-25 |
公开(公告)号: | CN105647909B | 公开(公告)日: | 2018-09-21 |
发明(设计)人: | 孙莉萍;钟勇;熊云景 | 申请(专利权)人: | 厦门大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C08F292/00;C08F220/06;C08F220/56;C08G83/00;C08G73/00 |
代理公司: | 厦门市首创君合专利事务所有限公司 35204 | 代理人: | 张松亭;姜谧 |
地址: | 361000 *** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提高 pcr 特异性 方法 | ||
1.一种提高PCR特异性的方法,其特征在于:在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应,使得经过二至三轮的PCR,产物仍然能保持特异性,该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6~38.4μg/mL,上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱,其中,
当所述聚合物为聚丙烯酸时,所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6~2.4μg/mL;
当所述聚合物为聚丙烯酰胺时,所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为2.4~9.6μg/mL;
当所述聚合物为聚乙二醇时,所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8~19.2μg/mL;
当所述聚合物为聚磺基甜菜碱时,所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8~38.4μg/mL。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下:取0.8~1.2mg/mL氧化石墨烯45~55mL和0.8~1.2g丙烯酸单体混合均匀,通氮气以除去溶液中的残留的氧,继而加入75~85mg过硫酸铵,同时加热到68~72℃反应2.5~3.5h,反应结束后冷却到室温,加入180~220mL水进行稀释,超声1~1.3h,透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸,离心收集固体,真空干燥后,即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下:取0.8~1.2mg/mL氧化石墨烯45~55mL和0.8~1.2g丙烯酰胺单体混合均匀,通氮气以除去溶液中的残留的氧,继而加入75~85mg过硫酸铵,同时加热到68~72℃反应2.5~3.5h,反应结束后冷却到室温,加入180~220mL水进行稀释,超声1~1.3h,透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酰胺,离心收集固体,真空干燥后,即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下:取10mL 3M的NaOH加入45~55mL 0.8~1.2mg/mL的氧化石墨烯中,超声反应2.5~3.5h,然后加入一定量的HCl中和过量的NaOH至中性,继而过滤水洗,并重新分散到水中,加入1.8~2.2mg/mL氨基修饰的PEG超声反应4~5min后加入4.5~5.5mM的EDC继续超声25~40min,最后再加入足量EDC至20mM搅拌过夜,离心取上清即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯,上述氨基修饰的PEG的结构式为且分子量为4000~6000。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下:取0.8~1.2mg/mL氧化石墨烯45~55mL,0.8~1.2g磺基甜菜碱单体,通氮气以除去溶液中的残留的氧,继而加入75~85mg过硫酸钾,同时加热到63~67℃反应13~17h,反应结束后冷却到室温,透析至除去未接上氧化石墨烯的聚磺基甜菜碱,离心取上清即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。
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