[发明专利]一种提高PCR特异性的方法

说明书

本发明公开了一种提高PCR特异性的方法，在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。本发明的方法在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯，可以显著增强PCR反应的特异性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高PCR特异性的方法。

背景技术

PCR是一种体外选择性扩增DNA的技术，每次扩增都以上一次扩增的产物作模板，目标产物在几小时内增加数百万倍。虽然PCR非常敏感，但是很多因素会影响PCR的扩增效率，如引物序列、模板DNA的GC含量、Mg²⁺浓度、退火温度等。为了克服PCR容易产生非特异性产物的局限性，纳米材料被用作添加剂来改善PCR。2005年首次发现金纳米粒子能提高PCR的产量及特异性(AngewandteChemie International Edition,2005,44:5100-5103)。此后发现量子点(Biochimie,2009.91:969-973)、碳纳米材料(Nanotechnology,2004,15:154-157)、聚合物纳米粒子(ACS applied materials&interfaces,2015,7:13142-13153)等对PCR都有一定的改善。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高PCR特异性的方法。

本发明的具体技术方案如下：

一种提高PCR特异性的方法，在PCR反应体系中添加聚合物修饰的氧化石墨烯来进行反应，使得经过二至三轮的PCR，产物仍然能保持特异性，该聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～38.4μg/mL，上述聚合物为聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚乙二醇或聚磺基甜菜碱。

在本发明的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚丙烯酸，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为0.6～2.4μg/mL。

在本发明的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚丙烯酰胺，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为2.4～9.6μg/mL。

在本发明的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚乙二醇，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～19.2μg/mL。

在本发明的一个优选实施方案中，所述聚合物为聚磺基甜菜碱，所述聚合物修饰的氧化石墨烯在PCR反应体系中的终浓度为4.8～38.4μg/mL。

进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酸单体混合均匀，通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸铵，同时加热到68～72℃反应2.5～3.5h,反应结束后冷却到室温，加入180～220mL水进行稀释，超声1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酸，离心收集固体，真空干燥后，即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。

进一步优选的，所述聚合物修饰的氧化石墨烯的制备方法如下：取0.8～1.2mg/mL氧化石墨烯45～55mL和0.8～1.2g丙烯酰胺单体混合均匀，通氮气以除去溶液中的残留的氧，继而加入75～85mg过硫酸铵，同时加热到68～72℃反应2.5～3.5h,反应结束后冷却到室温，加入180～220mL水进行稀释，超声1～1.3h，透析以除去未接上氧化石墨烯的聚丙烯酰胺，离心收集固体，真空干燥后，即得所述聚合物修饰的氧化石墨烯。