[发明专利]检测吗啡及可待因的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测吗啡及可待因的酶联免疫试剂盒，其包括包被有吗啡偶联抗原的酶标板、吗啡单克隆抗体、酶标记抗抗体、吗啡标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测吗啡及可待因的方法，它包括：首先进行样品前处理，然后用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测火锅底料及辣椒酱中吗啡及可待因的残留量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测吗啡及可待因的酶联免疫试剂盒，其特别适于火锅底料及辣椒酱中吗啡及可待因残留量的检测。

背景技术

罂粟壳俗称大烟壳，为罂粟科植物罂粟割取浆汁后的干燥成熟果壳，内含20多种生物碱，其中含量最多的生物碱分别为吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱、那可汀。罂粟壳中生物碱虽然含量较少，但如果长期食用含有这类毒品的食物，会出现发冷、出虚汗、乏力、面黄肌瘦、犯困等症状，严重时可能对神经系统、消化系统造成损害，甚至出现内分泌失调等症状。在我国，罂粟壳作为非食用物质，是不允许在食品及调味品中添加使用的。但近年来少数食品生产经营者为了招揽顾客、牟取暴利，在火锅及其调味料中添加罂粟壳及其水浸物等违禁原料，使食物味道鲜美，严重危害消费者的健康。

检测罂粟壳中生物碱的方法主要有紫外分光光度法、荧光分光光度法、高效液相色谱法以及液相色谱-串联质谱法等。这些方法各有特点，现以高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法为主流，这两种方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用。与之相比，酶联免疫方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构简单、使用方便、价格便宜、便于携带的用于吗啡及可待因检测的酶联免疫试剂盒，并提供一种高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量检测方法。

本发明试剂盒，它包括：包被有吗啡偶联抗原的酶标板、吗啡单克隆抗体、酶标记抗抗体、吗啡标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液；所述吗啡偶联抗原是由吗啡半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原；所述吗啡半抗原是由3-氟-4-硝基苯胺与亚硝酸钠反应得到重氮盐，再与吗啡反应得到的，其分子结构式为：

所述吗啡单克隆抗体是以吗啡偶联抗原作为免疫原制备获得。

所述抗抗体为羊抗鼠抗抗体。

所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶标记的抗抗体是采用戊二醛法或过碘酸钠法将标记酶与抗抗体进行偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样品筛查，所述试剂盒还包括吗啡标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液。

所述吗啡标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L、24.3μg/L。

当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由A液和B液组成，A液为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。

所述洗涤液优选为pH为7.6，含有0.8％～1.2％吐温-20和0.01‰～0.02‰叠氮化钠的0.2～0.4mol/L磷酸盐缓冲液。