[发明专利]一种提高丝状真菌木质纤维素酶系表达及生物基化学品生产的方法

权利要求书

1.一种提高丝状真菌纤维素酶和/或半纤维酶的表达、和/或提高丝状真菌的纤维素降解能力、获得或提高丝状真菌葡萄糖转运吸收能力、和/或提高生物量生长以及以生物质或其衍生糖为原料发酵生产生物基化学品能力，包括步骤：利用敲除，突变，导入等基因工程方法对丝状真菌高亲和力葡萄糖转运蛋白进行基因工程改造（含表达水平变化），得到的工程菌株具备上述能力。所述转运蛋白基因包括粗糙脉孢菌NCU10021（HGT-1）及其同源基因和NCU04963（HGT-2）及其同源基因。

2.所述的丝状真菌包括但不限于：脉孢菌（Neurospora）、毁丝霉(Myceliophthora)、木霉(Trichoderma)、曲霉(Aspergillus)、青霉(Penicillin)、镰刀霉(Fusarium)等。

3.所述的葡萄糖转运蛋白包括：(a) 具有SEQ ID NO.: 2、或4中任一条所示氨基酸序列的多肽以及同源性达到或超过70%的氨基酸序列；或(b) 将SEQ ID NO.: 2、或4中任一条所述氨基酸序列的多肽经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽序列后形成的、同源性达到或超过70%、具有己糖转运活性的衍生多肽；其中，所述的己糖转运活性是指将己糖自细胞外转运至细胞内。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抑制包括敲除、或突变、和/或下调所述的葡萄糖转运蛋白的表达和/或活性。

5.一种所述葡萄糖转运蛋白或其基因的抑制剂的用途，其特征在于，(a)用于提高丝状真菌纤维素酶和/或半纤维酶的表达；和/或(b)用于提高丝状真菌的纤维素降解能力；和/或(c)用于提高丝状真菌葡萄糖转运吸收和生物量生长；和/或(d)用于提高丝状真菌以生物质（或其衍生糖）为碳源发酵生产生物基化学品能力。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的抑制剂包括所述葡萄糖转运蛋白的抗体、抑制性mRNA、反义RNA、microRNA(miRNA)、siRNA、shRNA 以及转运蛋白的活性抑制剂。

7. 一种如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，工程菌中所述葡萄糖转运蛋白被敲除、或突变、或表达水平被下调。

8. 一种生产纤维素酶和/或半纤维素酶的方法，其特征在于，在纤维素原料的存在下，培养权利要求7所述的工程菌，并从培养物中分离提纯所述的纤维素酶和/或半纤维素酶。

9. 一种降解纤维素并获得纤维素降解产物的方法，其特征在于，在木质素原料的存在下，培养权利要求7所述的工程菌，从而降解木质素并获得木质素降解产物。

10.一种提高五碳糖-六碳糖共利用的方法，其特征在于，在已糖-戊糖共存的条件下，培养权利要求7所述的工程菌，提高混合糖的发酵利用。

11. 权利要求1所述工程菌，其特征在于，工程菌中被过表达外源或上调内源所述葡萄糖转运蛋白基因。

12. 一种增强丝状真菌葡萄糖转运吸收和提高生物量生长的方法，其特征在于，在葡萄糖或者生物质水解液为碳源，培养权利要求11所述的工程菌，工程菌葡萄糖转运吸收能力增强，和/或生物量得到提高。

13.一种增强丝状真菌生物基化学品发酵能力的方法，其特征在于，在葡萄糖或者生物质水解液为碳源，培养权利要求11所述的工程菌，工程菌有机酸或有机醇等生物基化学品发酵能力得到提高。

14.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸为选自下组的序列：(A)编码权利要求1所述多肽的核苷酸序列；(B)编码SEQ ID NO.: 2、或4中任一所示多肽或同源性达到或超过70%的核苷酸序列；(C)如SEQ ID NO.: 1、或3中任一所示或同源性达到或超过70%的核苷酸序列；(D)与(A)-(C)任一所述或同源性达到或超过70%的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

15. 一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞染色体整合有外源或者上调权利要求14所述的多核苷酸。