[发明专利]一种生物识别分子固定到生物芯片的方法

权利要求书

1.一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)生物芯片的羟基化：将生物芯片浸渍于羟基化试剂中，得到清洁的表面羟基化的生物芯片，之后进行干燥；

2)生物芯片的硅烷化：将步骤1)干燥后的羟基化的生物芯片浸渍于带有琥珀酸酐基团的硅烷化试剂中，进行硅烷化反应，得到硅烷化的生物芯片；

3)生物芯片的羧基化：将步骤2)得到的硅烷化的的生物芯片冲洗干净后置于水中，进行羧基化反应，得到羧基化的生物芯片；

4)将步骤3)得到的羧基化生物芯片放入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液中，进行活化羧基反应；

5)将步骤4)得到的活化羧基反应后的生物芯片放入生物识别分子的溶液中，进行缩合反应，得到表面固定有生物识别分子的生物芯片；所述生物识别分子具有氨基。

2.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤1)中，所述羟基化试剂为浓硫酸和双氧水按体积比2∶1至3∶1混合后得到的混合物；所述浸渍的温度为15-35℃，时间为25-60min。

3.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤2)中，所述硅烷化试剂为二氢-3-[3-(三乙氧基硅基)丙基]呋喃-2，5-二酮的无水丙酮溶液，该溶液中，二氢-3-[3-(三乙氧基硅基)丙基]呋喃-2，5-二酮的体积分数为2％-10％。

4.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤2)中，所述硅烷化反应反应温度为10-40℃，反应时间为0.5-4h。

5.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤2)中，所述硅烷化反应反应温度为25℃，反应时间为1h。

6.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤3)中，所述羧基化反应的反应温度为10-40℃，反应时间为2-8h。

7.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤4)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1∶1。

8.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤4)中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液中，所述N-羟基琥珀酰亚胺的体积分数为3％。

9.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤4)中，活化羧基反应的反应温度为10-40℃，反应时间为0.5-4h。

10.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤5)中，所述生物识别分子为带氨基的DNA片段、包被抗原、抗体或核酸适体；DNA片段的浓度为0.5-3μg/mL、包被抗原的浓度为1-5μg/mL、抗体的浓度为0.5-5μg/mL、核酸适体的浓度为0.5-3μg/mL；所述缩合反应的反应温度为10-40℃，反应时间为8-15h。

11.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤5)中，所述缩合反应的反应温度为20-30℃，反应时间为10-15h。

12.根据权利要求1所述一种生物识别分子固定到生物芯片的方法，其特征在于，步骤1)中，得到清洁的表面羟基化的生物芯片之后且在干燥之前，还包括以下步骤：将得到清洁的表面羟基化的生物芯片于超纯水中超声洗涤，直至超声洗涤后所得溶液的pH为中性，然后用氮气吹干；

步骤1)中，所述干燥的方法为：在105℃的干燥箱干燥2-4h；

步骤2)中，得到硅烷化后的生物芯片后还包括以下步骤：将硅烷化后的生物芯片用无水丙酮溶液进行清洗，并用氮气吹干，于150-250℃下烘烤10-60min；

步骤3)中，硅烷化后的生物芯片用无水甲苯或丙酮冲洗三遍，用水冲洗三遍，然后放入超纯水中，硅烷化试剂的琥珀酸酐基团水解生成羧基基团；所述生物芯片的材质为石英玻璃。