[发明专利]物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种物种鉴别试剂盒和物种鉴别 方法。

背景技术

细胞培养，最害怕被污染，不仅是要避免细菌,霉菌的污染，也要避免 污染到其他种类的细胞。但是在实验时，常常需要操作不同种类的细胞， 即使很熟练的操作人员，还是有可能会有细胞混杂的情况。

由于细胞在显微镜下的型态，差别不大，因此细胞培养时，如果发生 细胞污染，是没有办法可以区别的。以至于一直到实验结束，都不知道使 用的细胞，已经不是原本的细胞了，也导致实验结果不被采信，或是做出 错误的结论。

因此，如果有一种物种鉴别试剂盒和物种鉴别方法能够简单、快速、 灵敏、准确地鉴别出细胞的物种就显得非常具有意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够简单、快速、灵敏、准确 地鉴别物种的物种鉴别试剂盒，以克服现有技术存在的不足。

为解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

一种物种鉴别试剂盒，其特征在于：包括一个聚合酶链式反应试剂、 一个阳性对照品、一个无菌水以及至少一种物种的专一性引物对。

在本发明的物种鉴别试剂盒，有15种物种的专一性引物对，所述15 种物种的专一性引物对分别为兔、马、鸡、狗、绿猴、猪、老鼠、大鼠、 猫、人、恒河猴、牛、仓鼠、果蝇、鱼的专一性引物对。

在本发明中，通过下列步骤来确定物种的专一性引物对：

(1)选定待鉴别的物种：依照目前最常见混杂的样品，选定待鉴别的 物种。

(2)比对基因库：搜寻基因库，比对待鉴别物种的异同，选定各物种 专一的检测基因序列作为引物。

(3)设计引物：选定检测基因序列作为引物，设计聚合酶链式反应所 用引物，需考虑专一性、灵敏度，以及各种反应条件。

(4)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物设计完成后，以细胞株 进行模拟测试专一性，如专一性不足，则重新设计引物。

(5)以阳性对照质粒验证灵敏度：引物专一性达标后，以阳性对照质 粒来检测引物灵敏度，目标100颗细胞即可检测，如果灵敏度不足，则重 新设计引物。

(6)以细胞株模拟物种进行专一性测试：引物专一性与灵敏度皆达标 后，以细胞株相互混合，模拟物种混杂，测试引物的鉴别效能。

另外，本发明还提供一种物种鉴别方法，该鉴别方法采用上述物种鉴 别试剂盒，其步骤为：

(1)将待测细胞与各个物种的专一性引物对进行PCR反应；

(2)将PCR反应产物进行跑胶，获得PCR反应产物大小；

(3)根据PCR反应产物大小鉴别出待测细胞物种。

采用上述技术方案，本发明相比现有技术具有简单、快速、灵敏、准确 地鉴别细胞物种的优点，具体体现在：

(1)操作简便:只要使用本专利提供的试剂盒，就可以鉴别细胞的物 种。

(2)判读容易:每个物种的聚合酶链式反应产物大小固定，讯号清晰， 容易判读。

(3)专一性强:单一物种只会有专一的讯号，不会与其他物种混淆。

(4)灵敏度高:100颗细胞就可以正确鉴别物种。

(5)用途广泛：不仅能够鉴别出单一物种的细胞物种；而且可以鉴别 物种混杂的细胞物种。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明：

图1A、图1B为兔的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶 结果图；

图2为马的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；

图3A、图3B为鸡的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶 结果图；

图4为狗的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；

图5为绿猴的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；

图6为猪的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；

图7A、图7B为老鼠的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑 胶结果图；

图8A、图8B为大鼠的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑 胶结果图；

图9为猫的专一性引物与15个物种进行PCR反应后的跑胶结果图；