[发明专利]一种用于微拟球藻基因沉默的RNAi载体及其应用有效
| 申请号： | 201610184011.9 | 申请日： | 2016-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN107236756B | 公开（公告）日： | 2021-04-23 |
| 发明（设计）人： | 魏力;辛一;王勤涛;徐健 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N1/13;C12R1/89 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 李颖;周秀梅 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 微拟球藻 基因 沉默 rnai 载体 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于微拟球藻基因沉默的RNAi载体，其特征在于：RNAi载体以phir-PtGUS作为骨架，包括微拟球藻内源基因微管蛋白（tublin）启动子、终止子、作为抗性选择标记基因的博来霉素抗性基因ble和靶基因；其中，终止子为硅藻Fcp基因；
微拟球藻内源基因微管蛋白（tublin）启动子为以SEQ ID No.1为模板，使用引物Notub_fw：5’ GCGAGCTCGCCAGCTGCCTCAT3’；和Notub_rv：5’GGCCATGG3TGTGTCCGCCGCC’；扩增所得产物；
靶基因为沉默靶基因及微拟球藻本身RNAi元件识别的发夹结构。
2.按权利要求1所述的用于微拟球藻基因沉默的RNAi载体，其特征在于：所述发夹结构为针对靶基因形成发夹结构的反向重复序列；即，针对沉默靶基因序列设计400bp的正向序列和200bp的反向序列，其中这两个序列用于共同的200bp序列，在反向连接后能够互补形成颈环结构。
3.一种权利要求1中所述的用于微拟球藻基因沉默的RNAi载体在微拟球藻基因沉默中的应用。
4.一种宿主细胞，其特征在于：宿主细胞为包含权利要求1所述的载体。
5.按权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于：宿主细胞为微拟球藻。
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