[发明专利]一种灵芝蛋白肽-硒螯合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种灵芝蛋白肽-硒螯合物的制备方法，属于食品生物技术领域。

背景技术

硒（Se）是人体必需的一种重要矿质元素，具有重要的生理功能，已有的大量研究表明很多种疾病都与硒营养状况密切相关。人体主要是通过饮食获得硒，人工补硒的方法是口服含硒制剂。一般补硒的方法是用无机硒化合物（亚硒酸钠和硒酸钠）制成口服制剂。但是，无机硒强化剂吸收和利用的效果不理想，生物有效性低，而且具有较强的毒副作用，最低致死量相对较小，中毒量与需要量之间范围小，存在较大的安全隐患，因而被严格限制其使用。研究显示，无机硒经生物转化后的有机硒化合物毒性低，吸收率更高，生物利用率和生物活性也更高，在激发免疫反应上比无机硒显著。

灵芝属于担子菌纲(Basidiomycetes)多孔菌科(Polyporaceae)灵芝亚科(Ganodermatoideae)灵芝属(Ganoderma)，因其具有滋补强壮、延年益寿、补气安神等作用，在民间享有“仙草”的美誉。灵芝类所含活性成分复杂，目前的研究多集中在其多糖生物活性上，对灵芝蛋白质的研究较少。利用生物技术对灵芝进行蛋白质资源的深加工，进行生物活性肽的筛选和提取分离，然后利用无机硒进行螯合，制备多肽-硒螯合物，将无机硒转变成有机硒。这种灵芝生物活性多肽-硒螯合物能显著提高硒元素的吸收率和利用率，而且还具有抗氧化、抗菌、免疫调节、降血脂和降血糖等活性，有很高的开发价值和应用前景，为食药用菌资源的利用开辟了新的途径。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供一种灵芝蛋白肽-硒螯合物的制备方法，采用碱溶酸沉法或硫酸铵沉降法提取灵芝中的蛋白提取率高，提取率达75.34%~82.75%，制备的灵芝蛋白肽-硒螯合物中硒含量为2326~4048ug/g，为开发有机硒营养补充剂与功能性食品提供理论依据和技术支持。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的灵芝蛋白肽-硒螯合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）灵芝蛋白提取：利用碱溶酸沉法或硫酸铵沉降法提取灵芝中的蛋白质；

（2）酶解：采用蛋白酶对步骤（1）得到的灵芝蛋白进行有限酶解，灭酶，制备灵芝蛋白多肽复合物溶液；

（3）多肽-硒螯合物制备：采用固体高温混合法或者液体螯合法使无机物亚硒酸钠中的硒与灵芝蛋白肽进行螯合，制备灵芝蛋白肽-硒螯合物；

（4）将步骤（3）得到的灵芝蛋白肽-硒螯合物进行冷冻干燥。

步骤（1）中，碱溶酸沉法的具体操作如下：将灵芝超微粉碎，将粉碎后的灵芝与蒸馏水以w/v为1:20-80的比例混合，利用1.0wt%-5.0wt%NaOH调节pH至8.0-10.0，超声提取10-50min，超声功率为100-200W，水浴提取60-120min，温度60-100℃，提取后用纱布过滤，滤液为碱提的灵芝蛋白溶液，用盐酸调节碱提的灵芝蛋白溶液pH至2.0-5.0进行蛋白沉淀，离心得沉淀蛋白，水洗至中性再次离心，将沉淀冷冻干燥即得灵芝蛋白；硫酸铵沉降法的具体操作如下：将灵芝超微粉碎，将粉碎后的灵芝与蒸馏水以w/v为1:20-60的比例混合，逐步加入固体硫酸铵使硫酸铵的饱和度达40-60wt%，离心得食用菌蛋白沉淀，利用透析法脱盐后冷冻干燥得灵芝蛋白；所述离心沉淀蛋白的离心条件为3500-5000r/min，离心5-20min；

步骤（2）中，将步骤（1）得到的灵芝蛋白溶解在水中使蛋白质量浓度达1.0-5.0wt%，用1.0wt%-5.0wt%的NaOH或KOH溶液将pH调节到7.0-11.0，温度保持在40-80℃，加入1.0-5.0wt%蛋白酶，水解30-90min，灭酶，得到灵芝蛋白多肽复合物溶液；所述蛋白酶采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶中的一种。