[发明专利]一种获取砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法

权利要求书

1.一种获取砀山酥梨外植体的方法，其特征在于，

S1、在10-12月份，选择田间生长健壮、芽体饱满无病虫害的一年生砀山酥梨中庸枝，若还存有少部分叶片未脱落的，人工将其上面的叶片剪去，留叶柄；用清水冲洗干净,将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝～2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入温度5℃～7℃环境条件中处理7d～10d，每隔2d换水1次，每次换水同时将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝，最后将枝条再冲洗一遍，再用湿沙布包裹待处理；

S2、在翌年元月-2月份，结合冬季梨树修剪，将剪除废弃的枝条拾回，剪成小于60㎝的段，所述枝条是选取一年生中庸枝，用清水冲洗干净,再用湿沙布包裹待处理；

S3、将S1、S2包裹待处理的枝条置于温度－3℃～0℃环境中暗处理45d，取出，再将枝条基部下端呈45℃剪去2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入人工气候箱，人工气候箱设置的培养条件为:昼/夜气温为25℃/16℃，光照强度3000Lx，昼/夜时间分配为16h/8h，空气相对湿度80％，隔2d换水1次,每次换水同时将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝，直至新梢生长5㎝-10㎝时，采集新梢作为组培外植体。

2.一种获取砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法，包括砀山酥梨外植体获得与消毒及预处理、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接，其特征在于，

所述砀山酥梨外植体获得是指：

S1、在10月-12月份，选择田间生长健壮、芽体饱满无病虫害的一年生砀山酥梨中庸枝，若还存有少部分叶片未脱落的，人工将其上面的叶片剪去，留叶柄；用清水冲洗干净,将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝～2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入温度5℃～7℃环境条件中处理7d～10d，每隔2d换水1次，每次换水同时将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝，最后将枝条再冲洗一遍，再用湿沙布包裹待处理；

S2、在翌年元月-2月份，结合冬季梨树修剪，将剪除废弃的枝条拾回，剪成小于60㎝的段，所述枝条是选取一年生中庸枝，用清水冲洗干净,再用湿沙布包裹待处理；

S3、将S1、S2用湿沙布包裹待处理的枝条置于温度－3℃～0℃环境中暗处理45d，取出，再将枝条基部下端呈45℃剪去2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入人工气候箱，人工气候箱设置的培养条件为:昼/夜气温为25℃/16℃，光照强度3000Lx，昼/夜时间分配为16h/8h，空气相对湿度80％，隔2d换水1次,每次换水同时将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝，直至新梢生长5㎝-10㎝时，采集新梢作为组培外植体。

3.根据权利要求2所述的一种获取砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法，其特征在于，

所述外植体的消毒是指：将外植体用洗衣粉浸泡30min后再用流水冲洗1h，然后先放入以W/V计6％Vc溶液中浸泡15min，并不断振荡，再置于超净工作台上，用以V/V计75％的酒精溶液消毒25s，再用无菌水冲洗3次后用以V/V计0.1％的HgCl₂溶液浸泡5～7min，所述的HgCl₂溶液每500mL添加有200μL吐温-80，最后用无菌水冲洗3次，进行外植体预处理；所述外植体预处理是指用经灭菌处理过的剪刀将外植体剪成2cm～3cm的小段，每段带有一个腋芽或者顶芽，之后用无菌滤纸吸干附着在表面的水分，等待接入诱导培养基。

4.根据权利要求2所述的一种获取砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法，其特征在于，所述诱导培养是指，将预处理后的外植体形态学下端向下接入诱导培养基上，于25±1℃、光照1500Lx～2500Lx、光照时间为12h～16h/d的条件下培养25d～30d，得到分化出芽丛的试管苗；所述诱导培养基配方为MS+1.5～2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.2～0.6％AC+30g/L蔗糖+6g/L琼脂，pH值为5.8～6.0。