[发明专利]一种获取砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法

说明书

本发明公开了一种砀山酥梨外植体及提高组培苗成活率的方法，选择田间生长健壮、芽体饱满无病虫害的一年生中庸枝，通过人工培养获得5㎝‑10㎝的“新稍”，将其作为组培的外植体，然后再将该外植体经消毒及预处理、诱导培养、增殖分化培养、接穗培养和嫁接等步骤获得砀山酥梨种苗。本发明方法简单，充分利用冬季修剪去除的将丢弃的枝条。通过本发明人工方式获得大量“新稍”，提供组培所需足够的外植体，可进行砀山酥梨工厂化快速繁殖脱毒的优良种苗；且本发明组培方法成活率达96％。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种梨组织培养的外植体获取及提高组培苗成活率的组培方法，具体说是在10月-翌年2月获取砀山酥梨外植体及提高砀山酥梨组培苗成活率的方法。

背景技术

砀山酥梨原产安徽省砀山县，至今有2000多年的历史。砀山酥梨耐盐碱、耐瘠薄、耐贮藏、酥脆多汁等等综合性状优良，至今无其他品种替代。目前，仅砀山酥梨这一个品种的栽培面积仍占全国梨生产总面积20％以上，但在长期的无性繁殖过程中，感染并积累了多种病毒，严重影响梨果的产量和质量；随着分子生物学领域技术迅猛发展，利用基因工程进行种质改良研究也进一步深入。无论是种苗脱毒纯化或利用基因工程进行种质改良研究等，都需要进行大量的砀山酥梨组织培养，而外植体的选择是组织培养的第一步，选材的部位、时期等都会影响到外植体的成活率。梨的组织培养分为茎尖培养、茎段培养、胚培养、花药培养和叶片培养，考虑到成活率、取材是否容易以及生产成本等诸多因素，目前在梨的组织培养中应用比较广泛的是采取旺盛生长的新梢作为外植体，取其茎尖作接种材料培养，由于此期外植体的酚类物质积累较少，多酚氧化酶活性弱，外植体不容易褐化，成活率最高。

砀山酥梨是落叶果树，具有符合自身特性的品种物候期，其新梢旺盛生长期一般在4月上旬至5月上旬，到6月中旬基本停止生长，进入10月份以后，砀山酥梨叶柄开始形成离层而开始脱落，已经没有新萌发的新稍。因此，在生产上或实验室所需组培，一般只能在每年的4月上旬至5月上旬能获得大量优良外植体，满足当季组培需要。而砀山酥梨在组培时增殖倍数较低，一般不超过3倍，并且最多继代培养6代，否则影响其生长势和成活率。也因此，无论利用基因工程进行种质改良研究或砀山酥梨规模化种苗繁殖等，不能周年提供足够的组培苗严然已成为产业发展的瓶颈。

本项目组经10余年反复试验研究，终于获得一种方法，能在10月-翌年2月份获得大量的组培外植体，获得当期充足的组培苗，并能充分利用冬季修剪去除的将丢弃的枝条，操作简单，并且能提高砀山酥梨组培苗成活率。

发明内容

本发明的目的是提供一种在10月-翌年2月通过人工培养获取砀山酥梨外植体的方法以及基于该外植体提高砀山酥梨组培苗成活率的组培方法。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：

在10-12月份获得砀山酥梨组培外值体的方法，其特点在于，

S1、在10-12月份，选择田间生长健壮、芽体饱满无病虫害的一年生中庸枝，若还存有少部分叶片未脱落的，人工将其上面的叶片剪去，留叶柄；用清水冲洗干净,将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝～2㎝，立即插入盛水2㎝～4㎝深的玻璃器皿中，置入温度5℃～7℃环境条件中处理7d～10d，每隔2d换水1次，每次换水同时将枝条基部下端呈45℃剪去1㎝，最后将枝条再冲洗一遍，再用湿沙布包裹待处理；

S2、在翌年元月-2月份，结合冬季梨树修剪，将剪除废弃的枝条拾回，剪成小于60㎝的段，最佳是选取一年生中庸枝，用清水冲洗干净,再用湿沙布包裹待处理。