[发明专利]一种猪伪狂犬病毒的培养方法

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，包括：

（1）配置细胞亲和剂，将细胞亲和剂的各物质溶于去离子水中并过滤；

（2）配置适用于猪伪狂犬病毒培育的DMEM培养液；

（3）培育单层细胞；

（4）将单层细胞、DMEM培养液以及细胞亲和剂混合均匀，然后放置细胞培养箱中静置；该细胞亲和剂的终浓度为0.01%～1%；

（5）静置完成后取出，并迅速加入猪伪狂犬病毒混合均匀，最后放置到细胞培养箱进行培养，直至细胞病变脱落。

2.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述细胞亲和剂包括苹果酸、草酸、山梨酸、磷酸、磷酸氢二钠、氯化钾和氯化钠。

3.如权利要求2所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述苹果酸为1～10份，草酸为1～12份，山梨酸为1～10份，磷酸为0.1～1份；所述磷酸氢二钠为1～16份，氯化钾为6～60份，氯化钠为1～9份。

4.如权利要求3所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述苹果酸为1～10份，草酸为1.2～12份，山梨酸为1～10份，磷酸为0.1～1份；所述磷酸氢二钠为5～7份，氯化钾为6～10份，氯化钠为3～8份。

5.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述单层细胞的具体培育过程为：

将胎牛血清加入DMEM培养液混合后制成溶液，血清加入体积范围为DMEM培养液体积的1%～8%，再将细胞加入到该溶液中进行单层培养，待培养好后弃去溶液保留细胞，并用无血清液体清洗后获得单层细胞。

6.如权利要求5所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述细胞包括Vero细胞、293细胞、ST细胞、BHK细胞中的一种或多种；所述无血清液体为无菌去离子水、无菌PBS、无菌无血清DMEM培养液；所述无血清液体的清洗次数为2～3次。

7.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述DMEM培养液的配置过程为：

DMEM溶于去离子水中，搅拌至完全溶解，调节pH值，并用无菌滤膜进行除菌过滤，放4℃待用。

8.如权利要求7所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述DMEM培养液的pH值为6.8～7.8。

9.如权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒的培养方法，其特征在于，所述步骤（4）中的静置时间为1～30min。