[发明专利]一种检测牛冠状病毒的引物、探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测牛冠状病毒的引物，其特征在于，所述引物如SEQIDNO:1和 SEQIDNO:2所示。

2.权利要求1所述的引物在制备检测牛冠状病毒的试剂盒中的应用。

3.一种检测牛冠状病毒的探针，其特征在于，所述探针如SEQIDNO:3所 示。

4.根据权利要求3所述的检测牛冠状病毒的探针，其特征在于，所述探针 的所述探针的3’端结合有荧光淬灭基团，5’端结合有荧光报告基团。

5.根据权利要求4所述的检测牛冠状病毒的探针，其特征在于，所述荧光 淬灭基团为TAMRA，所述荧光报告基团为FAM。

6.一种检测牛冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求 1所述的引物和权利要求3～5任一项所述的探针。

7.一种检测牛冠状病毒的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物 和权利要求3～5任一项所述的探针，包括以下步骤：

以待测样本的RNA反转录得到的cDNA作为模板，进行荧光定量PCR扩 增，比较扩增曲线CT值；

其中，所述荧光定量PCR的扩增体系为：q-pcrMix酶10μL，引物SEQID NO:1和SEQIDNO:2各0.2μL，SEQIDNO:3探针0.1μL，分子生物学用水7.46 μL，Rox参比染料0.04μL，cDNA模板2μL；

荧光定量PCR的扩增反应程序为：50℃2min；95℃2min，95℃3s，60℃ 30s，40个循环。

8.根据权利要求7所述的检测牛冠状病毒的方法，其特征在于，所述反转 录包括如下步骤：

(1)、将RNA加入到预混液1中，混合均匀后，65℃保温5min后迅速冰上 急冷3min，所述预混液1的配方为：50μM的RandomPrimer1μL，10mMeach 的dNTPMixture1μL；

(2)、将上述反应液加入到RT预混液2中反应如下：30℃10min、42℃60min、 70℃15min，即得cDNA，所述预混液2的配方为：5×PrimeScriptBuffer4μL， 40U/μL的RNaseInhibitor0.5μL，200U/μL的PrimeScriptReverseTranscriptase1 μL，RNasefreeH₂O4.5μL。