[发明专利]一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法

权利要求书

1.一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于具体步骤依次如下：

A、将对照与待检烟草品种种子分别播种于已标识的营养钵中，置于光照培养架上培养，24小时内辅助灯光设计为开灯8~10小时，关灯14~16小时，室内温度保持在25~28℃，根据营养钵中营养土干湿情况补充水分；

B、待烟苗长出7~10片真叶后，随机选取数量相等的对照与待检烟草品种烟苗，每株烟苗采集1~3片真叶，采用CTAB小样法提取和纯化基因组总DNA，将每份DNA浓度调至相同，为100~200ng/μl，对照烟草品种各烟苗DNA等量混合构建成为对照DNA混合池，待检烟草品种各烟苗DNA等量混合构建成为待检DNA混合池，-20℃保存备用；

C、利用基因组测序技术对步骤B中的对照和待检烟草品种DNA混合池分别进行40~50倍深度的重测序，获得重测序数据，根据烟草基因组参考序列采用生物信息学方法进行基因组序列拼接与组装，获得对照和待检烟草品种全基因组序列；

D、利用生物信息学方法比较对照与待检烟草品种全基因组序列的碱基差异，计算出待检烟草品种纯度，以此作为判断待检烟草品种纯度高低的依据。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于：在步骤B中，选取对照与待检烟草品种烟苗数量要相等，为10-15株。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于：在步骤B中，将提取和纯化后的每株烟苗的DNA浓度调至相同，为100~200ng/μl。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于：在步骤B中，对照与待检烟草品种各烟苗DNA分别等量混合构建成为对照DNA混合池与待检DNA混合池。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定烟草品种纯度的分子生物学方法，其特征在于：在步骤C中，对照和待检烟草品种基因组的重测序深度为40~50倍。