[发明专利]一种DC-CIK细胞培养试剂及其培养方法有效
申请号: | 201610197485.7 | 申请日: | 2016-03-31 |
公开(公告)号: | CN105602902A | 公开(公告)日: | 2016-05-25 |
发明(设计)人: | 谷超 | 申请(专利权)人: | 谷超 |
主分类号: | C12N5/0784 | 分类号: | C12N5/0784;C12N5/0783 |
代理公司: | 长沙星耀专利事务所 43205 | 代理人: | 许伯严 |
地址: | 210009 江苏省南*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 dc cik 细胞培养 试剂 及其 培养 方法 | ||
1.一种DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:包括DC细胞培养试剂、CIK细胞培养试 剂和共培养试剂;所述DC细胞培养试剂包括DC细胞培养试剂A和DC细胞培养试剂B, DC细胞培养试剂A包含GM-SCF和IL-4,DC细胞培养试剂B包含GM-SCF、IL-4、TNF-α 和MDC;所述CIK细胞培养试剂包括CIK细胞培养试剂A和CIK细胞培养试剂B,CIK细 胞培养试剂A包含INF-γ,CIK细胞培养试剂B包含OKT-3、IL-1α和IL-2;所述共培养试剂 包含化合物CephaloziellinN和IL-2。
2.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:还包括含有血浆的无血 清培养基。
3.根据权利要求2所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述无血清培养基中血 浆的体积百分含量为5%~15%。
4.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述DC细胞培养试剂 A中,GM-SCF的浓度为100~500U/mL,IL-4的浓度为100~500U/mL。
5.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述DC细胞培养试剂 B中,GM-SCF的浓度为100~300U/mL,IL-4的浓度为200~400U/mL,TNF-α的浓度为 300~500U/mL,MDC的浓度为5~15ng/mL。
6.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述CIK细胞培养试剂 A中,INF-γ的浓度为500~900U/mL。
7.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述CIK细胞培养试剂 B中,OKT-3的浓度为60~100ng/mL、IL-1α的浓度为100~200U/mL,IL-2的浓度为 600~800U/mL。
8.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述共培养试剂中,IL-2 的浓度为100~500U/mL。
9.根据权利要求1所述的DC-CIK细胞培养试剂,其特征在于:所述共培养试剂中,化 合物CephaloziellinN的浓度为20~40μg/mL。
10.一种利用权利要求1~9任一所述DC-CIK细胞培养试剂培养DC-CIK细胞的方法,其 特征在于,包括如下步骤:
步骤S1,将单个核细胞进行细胞培养,获得贴壁细胞和悬浮细胞;
步骤S2,采用DC细胞培养试剂A培养所述贴壁细胞,培养4~6天后,采用DC细胞培 养试剂B培养24~48h,得到DC细胞;采用CIK细胞培养试剂A培养所述悬浮细胞,培养 1~3天后,采用CIK细胞培养试剂B继续培养7~8天,继续培养过程中每隔3天补加IL-2, 获得CIK细胞;
步骤S3,将步骤S2中的DC细胞和CIK细胞混合,采用所述共培养试剂培养5~8天, 得到DC-CIK细胞。
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