[发明专利]一种DC-CIK细胞培养试剂及其培养方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种DC-CIK细胞培养试剂及其培养方法。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人们生命健康，在继切除手术、放疗、化疗之后，肿瘤免疫细胞治 疗是临床用于肿瘤治疗的第四大疗法，它是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是 一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫 细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发、增强机体自身免疫功能，从而 达到治疗肿瘤的目的。在现有的免疫细胞治疗中有相继出现LAK细胞疗法、TIL细胞疗法、 DC细胞疗法、CIK细胞疗法和DC-CIK联合疗法，在肿瘤治疗中发挥举足轻重的作用。

树突状细胞(Dendriticcells，DC)是机体功能最强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄 取、加工处理和递呈抗原，未成熟DC具有较强的迁移能力，成熟DC能有效激活初始型T 细胞，处于启动、调控、并维持免疫应答的中心环节。DC细胞是已知体内功能最强、唯一能 活化静息T细胞的专职抗原提呈细胞，是启动、调控和维持免疫应答的中心环节。通过大量 体外活化培养负载肿瘤抗原的DC细胞，当细胞数量达到一定数量后回输给病人，可诱导机 体产生强烈的抗肿瘤免疫反应。

CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)是一种新型的免 疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达 CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞(自然杀伤细胞)样T淋巴细胞，兼具有 T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。

DC和CIK共培养可以同时促进CIK细胞和DC细胞的增殖和免疫功能。化疗后应用 DC-CIK细胞可有效抑制肿瘤细胞生长，甚至使肿瘤完全消失；而且DC-CIK细胞的抗肿瘤效 应对集体免疫系统功能不产生危害，在当前对肿瘤特异性抗原了解相对较少的情况下，应用 DC-CIK细胞作为肿瘤放化疗和手术后的辅助治疗有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DC-CIK细胞培养试剂及其培养方法，以获得高增殖力、高 杀伤力的DC-CIK细胞。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种DC-CIK细胞培养试剂，包括DC细胞培养试剂、CIK细胞培养试剂和共培养试剂； 所述DC细胞培养试剂包括DC细胞培养试剂A和DC细胞培养试剂B，DC细胞培养试剂A 包含GM-SCF和IL-4，DC细胞培养试剂B包含GM-SCF、IL-4、TNF-α和MDC；所述CIK 细胞培养试剂包括CIK细胞培养试剂A和CIK细胞培养试剂B，CIK细胞培养试剂A包含 INF-γ，CIK细胞培养试剂B包含OKT-3、IL-1α和IL-2；所述共培养试剂包含化合物 CephaloziellinN和IL-2。

进一步地，所述的DC-CIK细胞培养试剂还包括含有血浆的无血清培养基。

进一步地，所述无血清培养基中血浆的体积百分含量为5％～15％。

进一步地，所述DC细胞培养试剂A中，GM-SCF的浓度为100～500U/mL，IL-4的浓度 为100～500U/mL。

进一步地，所述DC细胞培养试剂B中，GM-SCF的浓度为100～300U/mL，IL-4的浓度 为200～400U/mL，TNF-α的浓度为300～500U/mL，MDC的浓度为5～15ng/mL。

进一步地，所述CIK细胞培养试剂A中，INF-γ的浓度为500～900U/mL。

进一步地，所述CIK细胞培养试剂B中，OKT-3的浓度为60～100ng/mL、IL-1α的浓度 为100～200U/mL，IL-2的浓度为600～800U/mL。

进一步地，所述共培养试剂中，IL-2的浓度为100～500U/mL。

进一步地，所述共培养试剂中，化合物CephaloziellinN的浓度为20～40μg/mL。

一种利用上述DC-CIK细胞培养试剂培养DC-CIK细胞的方法，包括如下步骤：

步骤S1，将单个核细胞进行细胞培养，获得贴壁细胞和悬浮细胞；