[发明专利]一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法

权利要求书

1.一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，其特征在于，具体包括下述步骤：

(1)种子的萌发培养

在超净工作台上，取灭菌后的石蒜属植物种子接种到萌发培养基中，在光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间为14h·d^-1、温度为(25±2)℃的组培条件下，进行20～30天的培养后，种子萌发形成原生鳞茎；

所述萌发培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，萌发培养基中还仅含有浓度为0.2mg/L的α-萘乙酸、浓度为1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、30g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且萌发培养基的pH值为5.8；

所述石蒜属植物种子采用天然自交、人工杂交的石蒜属植物种子，包括换锦花种子、长筒石蒜种子、红蓝石蒜种子、换锦花与长筒石蒜的杂交种子、红蓝石蒜与换锦花的杂交种子；

(2)原生鳞茎的增殖培养

种子萌发形成原生鳞茎后，继续培养45～60天，在超净工作台上夹出种子萌发出的鳞茎，并接种到增殖培养基上后，在光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间为14h·d^-1，温度为(25±2)℃的组培条件下，进行2～3个月的增殖培养获得鳞茎丛；

所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，增殖培养基中还仅含有浓度为5mg/L的α-萘乙酸、5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、60g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且增殖培养基的pH值为5.8；

(3)不定芽的膨大培养

从增殖培养基上取出鳞茎丛，剥落能分开的不定芽，将不定芽的基盘朝下插入膨大培养基；

所述膨大培养基以MS培养基为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，膨大培养基中还仅含有浓度为2.0mg/L的α-萘乙酸、60g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且膨大培养基的pH值为5.9；

然后，在光照条件为全黑暗条件或光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间14h·d^-1条件，温度条件为温度为(25±2)℃的组培条件下，继续培养2～3个月，即获得显著膨大的小鳞茎，直径在5～12mm之间。

2.根据权利要求1所述的一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，其特征在于，所述步骤(1)中，取灭菌后的种子进行接种的具体方法为：

在超净工作台上，用干净的镊子夹住种子，将种孔朝下插入萌发培养基，使种子与培养基充分接触。

3.根据权利要求1所述的一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，其特征在于，所述步骤(2)中，将鳞茎接种到新鲜的增殖培养基的具体方法为：

在超净工作台上，用干净的镊子夹出鳞茎，接种前用解剖刀将胚根和真叶切去，并将每个鳞茎由基盘底部向上“十”字分切，然后以切口朝下插入增殖培养基，使伤口与增殖培养基充分接触。

4.根据权利要求1所述的一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，其特征在于，所述步骤(2)中，每瓶增殖培养基接种1株原生鳞茎，且鳞茎直径为3～5mm。

5.根据权利要求1所述的一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，其特征在于，所述步骤(3)中，将不定芽接种到膨大培养基的具体方法为：

从增殖培养基上取出鳞茎丛，用镊子和解剖刀切去冗余的根系及叶片，剥落能分开的直径为1～5mm的不定芽，然后将不定芽的基盘朝下插入膨大培养基，每个膨大培养基接种4～6个不定芽。