[发明专利]一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法

说明书

技术领域

本发明是关于植物快速繁殖技术领域，特别涉及一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法。

背景技术

营养生长期长、自然繁殖系数低是制约我国石蒜属植物规模化生产繁育的两个重要问题。自然条件下基质播种的种子一般要经过冬季休眠期，翌年春季才能萌发，在第一个生长周期内只长出1～2枚叶片，且在未积累充足养分转变为成熟的开花鳞茎之前一般不进行自然分球。

然而，在组培条件下，可以通过接种前对种子的冷藏及温水浸泡等处理打破种子休眠。同时，经过接种于不同配比激素的培养条件下加速鳞茎养分积累并促进侧芽萌发，从而缩短鳞茎营养生长期、提高繁殖系数。

目前，有关石蒜属植物组培扩繁体系均以成熟鳞茎为外植体实现植株再生，多采用鳞茎块或双鳞片形式，其缺陷主要有三点：一是由于成熟鳞茎长期生活于自然土壤环境，携带细菌、真菌等较多，组培污染率极高；二是挖取成熟鳞茎作为外植体，造成了对石蒜属植物野生种球资源的破坏与浪费；三是通过鳞片诱导不定芽，特别是双鳞片法，诱导率较低，同时诱导周期较长。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足，提供一种污染率低、增殖率高、培养周期短，能减少野生种球资源消耗的石蒜属植物离体原生鳞茎分生法。为解决上述技术问题，本发明的解决方案是：

提供一种石蒜属植物快速增殖的离体原生鳞茎分生法，具体包括下述步骤：

(1)种子的萌发培养

在超净工作台上，取灭菌后的石蒜属植物种子接种到萌发培养基中，在光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间为14h·d^-1、温度为(25±2)℃的组培条件下，进行20～30天的培养后，种子萌发形成原生鳞茎(不同种的种子萌发率为78.3％～89.7％)；

所述萌发培养基以MS培养基(Murashige and Skoog,1962)为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，萌发培养基中还含有浓度为0～0.2mg/L的α-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid,NAA)、浓度为0～1.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、30g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且萌发培养基的pH值为5.8～5.9；

(2)原生鳞茎的增殖培养

种子萌发形成原生鳞茎后，继续培养45～60天，在超净工作台上夹出种子萌发出的鳞茎，并接种到增殖培养基上后，在光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间为14h·d^-1，温度为(25±2)℃的组培条件下，进行2～3个月的增殖培养获得鳞茎丛(能获得18～37个的不定芽)；

所述增殖培养基以MS培养基(Murashige and Skoog,1962)为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，增殖培养基中还含有浓度为0.1～10.0mg/L的α-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid,NAA)、5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-benzyladenine,6-BA)、60g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且增殖培养基的pH值为5.8～5.9；

(3)不定芽的膨大培养

从增殖培养基上取出鳞茎丛，剥落能分开的不定芽，将不定芽的基盘朝下插入膨大培养基；

所述膨大培养基以MS培养基(Murashige and Skoog,1962)为基本培养基，即每升培养基中添加有4.43gMS粉，膨大培养基中还含有浓度为0～2.0mg/L的α-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid,NAA)、60～90g/L的蔗糖、8g/L的琼脂；且膨大培养基的pH值为5.8～5.9；

然后，在光照条件为全黑暗条件或光照强度为12.5μmol·m^-2·s^-1、光照时间14h·d^-1条件，温度条件为温度为(25±2)℃的组培条件下，继续培养2～3个月，即获得显著膨大的小鳞茎，直径在5～12mm之间。

在本发明中，所述步骤(1)中的石蒜属植物种子采用天然自交、人工杂交的石蒜属植物种子，包括换锦花(Lycoris sprengeri)种子、长筒石蒜(Lycoris longituba)种子、红蓝石蒜(Lycoris haywardii)种子、换锦花与长筒石蒜的杂交种子、红蓝石蒜与换锦花的杂交种子。