[发明专利]一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法

权利要求书

1.一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法，其特征是：它包括活性层凝胶和保护层凝胶，

活性层凝胶的制备：(1)配制混合溶液I，溶液I的基础溶剂是去离子水，其中含有1％～5％质量体积比的海藻酸钠，0.1％～0.5％质量体积比的小分子胶原蛋白，0.1％～0.5％质量体积比的透明质酸，0.1％～0.5％质量体积比的硫酸软骨素，(2)将提前培养好的、成活率90％以上的脐带间充质干细胞充分混合进溶液I中，使得脐带间充质干细胞的终浓度达到1×10⁶～1×10⁷个细胞每毫升，配制成混合液II，(3)将混合液II倒入提前准备好的平皿中，(4)向平皿中加入2倍体积以上，浓度为1.5％的CaCl₂溶液，静置30～120分钟制成凝胶，吸出CaCl₂溶液，并用无菌生理盐水清洗凝胶三遍以上，(5)向平皿中加入至少3倍于凝胶体积的间充质干细胞培养液，无菌培养6～10天，每隔1～2天换液一次，(6)培养结束后，利用无菌生理盐水清洗培养结束的凝胶3～6遍，备用；

保护层凝胶的制备：(1)配制混合溶液III，溶液III的基础溶剂是去离子水，其中含有1％～5％质量体积比的海藻酸钠，含1％～5％质量体积比的羧甲基壳聚糖,(2)将溶液III倒入提前准备好的平皿中，(3)向平皿中加入至少3倍溶液III体积以上的50～100g/L金尼平溶液，静置交联10～60分钟，制成凝胶,(4)将提前准备的活性凝胶层放置在保护层凝胶的上方，加入等面积的1～5kg的重物压制10～60分钟，然后向平皿中加入3倍凝胶体积以上的5％的氯化钙溶液，静置10～30分钟，使得凝胶更加稳定，并且活性层与保护层会相互结合,(4)吸出氯化钙溶液，然后用无菌生理盐水清洗3～6遍；

将活性层凝胶和保护层凝胶复合并进行低温冷冻干燥，形成凝胶海绵，密封包装后灭菌制备完成。

2.根据权利要求1所述的一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法，其特征是：活性层凝胶制备中第(1)步骤中的溶液I混合、分散均匀。

3.根据权利要求1所述的一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法，其特征是：活性层凝胶制备中第(3)步骤中的混合液II中液体厚度不超过3毫米。

4.根据权利要求1所述的一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法，其特征是：保护层凝胶制备第(2)步骤中溶液III液体厚度控制在3mm以下，所盛放溶液III的平皿面积要求略大于盛放溶液II的平皿。

5.根据权利要求1所述的一种用于糖尿病溃疡的活性凝胶海绵的制备方法，其特征是：凝胶海绵密封包装后采用15～20KGry的Co60进行辐照灭菌。