[发明专利]P1NP检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种人P1NP检测试剂盒，其特征是，主要包括：

(1)包被有链霉亲和素的微孔板，每个微孔包被的链霉亲和素量为0.24－0.36μg；

(2)生物素标记的鼠抗P1NP单克隆抗体溶液，其中生物素标记的鼠抗P1NP单克隆抗体的浓度为0.8－1.2μg/ml，用量为每微孔100μl；

(3)HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体溶液，其中HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体的工作浓度为1:2500-3000。

2.根据权利要求1所述的P1NP检测试剂盒，其特征是，所述每个微孔包被的链霉亲和素的量为0.3μg。

3.根据权利要求1所述的P1NP检测试剂盒，其特征是，所述生物素标记的鼠抗P1NP单克隆抗体的浓度为1.0μg/ml。

4.根据权利要求1至3任一项所述的P1NP检测试剂盒，其特征是，所述HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体的工作浓度为1:3000。

5.一种P1NP检测试剂盒的制备方法，其特征是，主要包括以下步骤：

(1)包被有链霉亲和素的微孔板：向每个微孔板的微孔中加80－120μl浓度为3μg/ml的链霉亲和素，37±2℃干燥，密封保存，洗板，封闭；

(2)制备生物素标记的鼠抗P1NP单克隆抗体溶液：将鼠抗P1NP单克隆抗体用PBS缓冲液和EDTA稀释，然后加入NH₂-ReactiveBiotin，轻轻混匀后置于37±2℃恒温箱中避光温育，离心，再用PBS缓冲液和EDTA稀释至终浓度为0.8－1.2μg/ml。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征是，所述每个微孔中加入链霉亲和素的量为100μl。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征是，所述微孔板的洗板和封闭为：加入链霉亲和素的次日，弃去孔内液体，加入洗涤液，漂洗，按200-250ul/孔加入封闭液，37±2℃封闭1-2小时或在4℃封闭过夜，然后弃去孔内封闭液。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征是，所述P1NP检测试剂盒还包括有HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体，该HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体的制备操作为：

(1)取鼠抗P1NP单克隆抗体冻干粉，与PBS缓冲液混合；

(2)取HRP干粉，用去离子水稀释，采用简易过碘酸钠法将HRP与鼠抗P1NP单克隆抗体交联，得到HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体；

(3)取制备后的HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体，用PBS和EDTA稀释，得稀释后的HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体，所述稀释后的HRP标记的鼠抗P1NP单克隆抗体工作浓度为1:2500－3500。

9.根据权利要求5至8任一项所述的制备方法，其特征是，所述鼠抗P1NP单克隆抗体的制备为：对小白鼠采用皮下注射方式进行免疫接种，初次免疫注射P1NP抗原，第3周、第4周及第5周注射P1NP抗原与不完全弗氏佐剂等体积混合溶液，第5周后取血检测效价，免疫达到预期效果后，则拉颈处死小鼠后取脾脏，然后采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。