[发明专利]用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样品前处理方法

权利要求书

1.一种用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样品前处理方法，其 特征在于，包括以下步骤：

1)将鱼置于流水养殖系统中，禁食48-96小时，挑取健康鱼，体表消毒 后，掀开体壁，暴露鱼的胆囊，用无菌磷酸盐缓冲液冲洗胆囊部位的血液、脂 肪；

2)用一次性注射器针头刺破胆囊，抽取胆汁3-10ml，然后用无菌磷酸盐 缓冲液稀释胆汁至体积百分比浓度为5-20％，保存于-20℃冰箱备用；

3)取100μL待测菌株菌液加入到10ml液体培养基中，在30-37℃恒温 培养箱中培养48小时，然后将菌液OD值在625nm波长调节至0.1；

4)取500μL的菌液，4000rpm，4℃，离心5min，收集菌体，加入500 μL步骤2)制得的含有体积百分比浓度为5-20％鱼胆汁的磷酸盐缓冲液，在 30-37℃恒温培养箱中孵育1-2小时。

2.根据权利要求1所述的用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样 品前处理方法，其特征在于，所述步骤1)为将体重为200-1200g健康鱼置于 流水养殖系统中，禁食48-96小时，然后挑取健康鱼，用体积百分比浓度为 75％乙醇擦拭体表，用钝头剪刀自肛门向脊柱方向剪开体壁，避开腹腔内组织， 剪刀头上挑，防止损伤组织，剪至鳃盖后缘后，再沿鳃盖后缘剪至下颌，掀开 体壁，暴露鱼的胆囊，用无菌磷酸盐缓冲液冲洗胆囊部位的血液、脂肪。

3.根据权利要求1所述的用于鱼类肠道益生菌候选菌株耐受力检测的样 品前处理方法，其特征在于，所述无菌磷酸盐缓冲液的配比为：1000ml去离 子水中含有磷酸二氢钾0.24g，磷酸氢二钠1.44g，氯化钠8.0g，氯化钾0.2g。