[发明专利]一种流行性出血热病毒检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及疾病检测技术领域，具体是涉及一种流行性出血热病毒检测试 剂盒。

背景技术

出血热即流行性出血热又称肾综合征出血热，是危害人类健康的重要传染 病，是由流行性出血热病毒(汉坦病毒)引起的，以鼠类为主要传染源的自然疫 源性疾病。以发热、出血、充血、低血压休克及肾脏损害为主要临床表现。

病毒侵入人体后直接作用于全身毛细血管和小血管，引起广泛的血管壁损 伤，使血管壁的通透性增高，导致组织或器官的水肿，从而出现全身皮肤粘膜 的充血或出血，如病人的面颊、鼻、颈部、前胸、上臂等处发红或有出血点， 并危及心、肺、脾、胃、肾、脑垂体、肾上腺等多处脏器；有些病人还有广泛的 微血栓形成，极易出现严重的水电解质酸碱平衡紊乱。最为严重的是损害人的 肾脏，重者往往死于尿毒症肾功能衰竭。病毒还会作用于神经系统，引起严重 的头痛、眼眶痛、腰痛及全身疼痛，病人普遍出现高热。重症或未能及时治疗 的病人，后期往往出现心力衰竭、肺肿、自发性肾破裂等严重并发症。该病病 情凶险、病程多会迁延月余，即使治愈也需要严格休息至少1-3个月，是一种 严重危害人类健康的疾病。

目前流行性出血热病毒抗体传统的检测方法是采用血清学诊断方法，包括 间接酶免吸附试验检测EHFIgG抗体、免疫荧光试验检测血清IgG抗体等，这 些方法均在一定程度上易出现假阳性或假阴性现象，给流行性出血热的临床诊 断带来一定干扰。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种流行性出血热病毒检测试剂盒。

本发明的技术方案是：

一种流行性出血热病毒检测试剂盒，包括纳米金标记的鼠抗人IgA抗体检 测探针、流行性出血热病毒混合特异性抗原、斑点金免疫集中渗滤装置，所述 的集中渗滤装置由塑料小盒、点加了流行性出血热病毒混合特异性抗原的硝酸 纤维素膜和吸水垫三部分组成，所述塑料小盒底部中央有一个与盒盖上的方孔 相对应相对应的方形凹槽。所述纳米金标记的鼠抗人IgA抗体浓度为1.90～ 2.04μg/mL，所述的流行性出血热病毒混合特异性抗原浓度为1.72～1.95μ g/mL。

进一步地，所述流行性出血热病毒混合特异性抗原是由家鼠型特异性抗原、 野鼠型特异性抗原和中间型特异性抗原按1:1:1的质量比组成的混合特异性抗 原。

进一步地，所述点加了流行性出血热病毒混合特异性抗原的硝酸纤维素膜 采用如下方法制备得到：

将流行性出血热病毒的家鼠型特异性抗原、流行性出血热病毒的野鼠型特 异性抗原和流行性出血热病毒的中间型特异性抗原按1:1:1的质量比混合，得 到将流行性出血热病毒混合特异性抗原，用稀释液调节浓度至1.72～ 1.95μg/mL，即得抗原浓缩液，-20～-4℃保存；将硝酸纤维素膜上放入调节好 浓度的流行性出血热病毒混合特异性抗原溶液中，静置20～30min，待硝酸纤 维素膜充分吸附流行性出血热病毒混合特异性抗原，取出，低温保存备用。

进一步地，所述的纳米金标记的鼠抗人IgA抗体检测探针的制备方法包括 如下步骤：

(1)制备纳米金溶液：用王水(体积比为3:1的浓HCL和浓HNO3)浸泡 容器一定时间，然后用超纯水清洗干净，烘干；向容器内加入99.14mL纯水和 0.86mL的2％氯金酸溶液，边搅拌边加热，加热至沸腾后继续煮沸8min，加入 2.5mL1％柠檬酸三钠水溶液，继续搅拌加热10min，冷却后加入纯水至100mL， 得到酒红色纳米金溶液；

(2)制备纳米金标记的鼠抗人IgA抗体检测探针:

a、调节胶体金溶液pH:取上述制备的胶体金溶液，用K₂CO₃溶液调节pH至 7.5～8.0；

b、稀释流行性出血热病毒混合特异性抗原：用磷酸盐缓冲液(PB)将流行 性出血热病毒混合特异性抗原稀释至蛋白含量为0.74～0.86mg/mL；

c、纳米金标记：取步骤b中的稀释液，在4℃条件下3000r/min离心22～ 25min，吸取上清液，弃去沉淀，边搅拌边将上清液逐滴加入到步骤a中调节好 pH的胶体金溶液中，充分混匀结合，静置；加入与前述混合液等体积的稳定剂， 在4℃条件下3000r/min离心24min，静置,弃上清，留沉淀物，用缓释剂重悬， 即得到纳米金标记的鼠抗人IgA抗体检测探针。