[发明专利]一种可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种药物微球的制备方法，特别是涉及一种可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法。

背景技术

在骨缺损临床治疗过程中，持续性炎症和感染的存在将会引起术后骨感染灶的复发以致清创手术的失败。大部分炎症中炎性因子TNF-α扮演着重要角色，同时NF-кB是炎症反应中关键的转录因子。NBD多肽是一种具有细胞膜穿透性的多肽，作为炎症抑制剂能特异性阻断NF-кB炎症信号通路。但对于NBD多肽干预骨内感染，尚有以下问题有待解决：(1)NBD多肽在骨感染病灶中的给药方式、给药浓度及使用时间有待确定；(2)NBD多肽体内的半衰期短，局部应用很快被稀释代谢，作为术后抗炎的关键，如何延长其在术区的持续作用时间，同时最大限度地降低其首过效应有待解决。

生物降解高分子缓释微球给药系统具有独特的药物保护作用及控制释放特性，作为多肽、蛋白质类大分子药物的传输载体，在延长药物的活性，提高药物稳定性等方面，具有比一般药物制剂明显的优越性。

常用的载药微球的制备方法为复乳法(w/o/w)。该方法主要包括四个步骤：初乳的制备、复乳的形成、微球的固化以及微球的收集与洗涤。复乳法是研究时间最早、应用范围最广的一种微球制备方法，其工艺简单，制备的微球载药量在微球中分布较均匀。

但是，依照传统的复乳法制备微球，容易造成微球粒径分布不均一，包封率不稳定，制成的微球容易破裂变形等问题，这会导致药物的大量流失，这对包括NBD多肽在内的贵重药品，是一种严重的损失。

因此，有必要开发新的负载NBD多肽的载物微球。

发明内容

为了解决现有技术的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种可降解聚合物 包载NBD多肽微球的制备方法，能制备粒径大小均一，包封率稳定的微球，且制备工艺更稳定，可根据需要获得各种形貌的微球。

本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法，包括以下步骤：

A.由生物相容性良好的可降解聚合物的有机溶液与NBD多肽的水溶液组成的油包水乳化液，作为第一次乳化后的初乳液；

B.将所述初乳液注入注射器中，用医用微量注射泵以一定速度推进所述注射器使所述初乳液注入到浓度为1％～6％的PVA剪切液中，转入离心管中，置于搅拌机中搅拌，搅拌过程中在注射器与装盛剪切液的容器外加冰浴，以保证NBD多肽不变性；搅拌机以一定速度转动时带动固定其上的铁棍一起旋转，从而带动PVA溶液旋转产生剪切作用，初乳液在旋转液体的剪切力作用下逐渐拉长变细，分散为小球珠；乳化液形成的小球珠在PVA溶液中逐渐扩散，最后固化成大小均匀的微球；

C.初乳液注射完毕反应完成之后，将微球离心洗涤，将收集到的微球冷冻干燥。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，所述步骤A中，所述可降解聚合物是选自：聚羟基乙醇酸(PLGA)、聚己内酯(PCL)、聚乳酸(PLA)、羟基乙酸聚合物(GA)。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，所述步骤A中，所述有机溶液中的有机溶剂是选自：二氯甲烷(DCM)、三氯乙烯(TCE)、四氯乙烯(PCE)、四氢呋喃(THF)、丙酮或乙酸乙酯(EAC)。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，所述步骤A中，所述的可降解聚合物的有机溶液是聚羟基乙醇酸(PLGA)的二氯甲烷(DCM)溶液。优选地，所述PLGA的DCM溶液的浓度为2.5％～15％。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，所述步骤A中，所述NBD多肽的水溶液的浓度为1.24％～5％。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，所述步骤B中，将注射器固定于医用微量注射泵上，针头与注射器连接后伸入50ml离心管中，铁棍固定于机械搅拌器上，同时铁棍伸入50ml离心管中，在水平位置上，铁棍底部低于针尖1-1.5cm。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，针管内径为0.2～1mm，针头与搅拌机的搅拌棒距离为0.1-0.3mm，针头伸入PVA溶液液面以下0.5-5cm。

根据本发明所述的可降解聚合物包载NBD多肽微球的制备方法的进一步特征，搅拌机的转速为1600-2000rad/min。