[发明专利]一种海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵提取物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一株海洋真菌哈茨木霉（Trichoderma harzianum）DLEN2008005及其应用。所述海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005于2016年1月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.12105；保藏地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。同时，本发明对海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的静置发酵液进行了活性物质的提取纯化，该菌株及其培养物，以及发酵液提取物具有很好的抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶的活性，在制备抗老年痴呆药物方面，以及在制备抗氧化药物和/或抑制乙酰胆碱酯酶活性的药物方面具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物技术领域。更具体地，涉及一种海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵提取物及其制备方法和应用。

背景技术

随着世界人口老龄化的加剧和老年痴呆（Alzheimer’s Disease, AD）发病率的不断增加，寻找抗老年痴呆的新药已迫在眉睫。

目前，被广泛接受的老年痴呆病理理论是胆碱能神经损伤假说。在该理论的指导下，乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，AChE）抑制剂是目前应用最广的抗老年痴呆症药物。同时不少研究发现，需氧细胞代谢过程中产生的超氧自由基会对脑组织造成损害，促进脑细胞的衰老和死亡，而且自由基还能损害细胞染色体，使第21号染色体畸变，从而发生AD。而抗氧化剂不仅能够稳定细胞膜，消除活性氧，同时还能抑制和清除脑内β淀粉样蛋白沉积，从而来预防和保护神经细胞免受损伤，从而延缓 AD的发展进程。

因为乙酰胆碱酯酶抑制剂和抗氧化剂均有治疗或延缓AD的作用，因此筛选具有抑制 AChE 活性和抗氧化双重功能的药物具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有老年痴呆治疗药物的不足，提供一种海洋真菌哈茨木霉（Trichoderma harzianum）DLEN2008005的发酵液活性提取物及其制备方法和应用，该菌株发酵液的活性提取物具有很好的抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶活性，在制备抗老年痴呆药物方面具有很好的应用前景。

本发明的目的是提供一种海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵提取物。

本发明另一目的是提供上述发酵提取物及其制备方法和应用。

本发明的再一目的是提供海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵活性物质及其提取纯化方法和应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵提取物，是由海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005的发酵液经过提取得到，所述海洋真菌哈茨木霉DLEN2008005于2016年1月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（其简称为CGMCC），保藏编号为：CGMCC No.12105；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

该菌株通过静置发酵后，将其发酵液的乙酸乙酯提取物与菌丝体甲醇提取物合并得到具有抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶活性的总粗提物，该提取物经硅胶柱层析及制备液相色谱分离，得到两个有效部分的组分1和组分2，具有抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶的显著活性，有作为抗老年痴呆药物的潜在用途。

所述海洋真菌哈茨木霉（Trichoderma harzianum）DLEN2008005是从中国大连海域的潮间带海藻龙须菜藻体组织内分离获得，具有抗氧化和抑制乙酰胆碱酯酶作用，依据《真菌鉴定手册》（魏景超，1979）鉴定为Trichoderma harzianum菌株。

该菌株的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。