[发明专利]一种用于基因纯化的装置及纯化方法

权利要求书

1.一种用于基因纯化的装置，其特征在于：所述装置包括吸头(4)、套筒(1)、筛板(3)和推杆(2)，吸头(4)与套筒(1)前端紧密贴合，筛板(3)为与套筒内壁横截面大小配合的圆片状，筛板(3)、推杆(2)依次置于套筒(1)内部，并分别与套筒(1)内侧壁紧密贴合。在筛板(3)与套筒(1)前端之间，放置有吸附材料。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于：所述吸附材料为SiO₂粉末；作为优选，所述SiO₂粉末的粒径为20-80μm。

3.根据权利要求1所述的装置，其特征在于：所述装置的规格为2.5ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml或300ml。

4.根据权利要求1-3任一所述的装置，其特征在于：所述装置的容积与SiO₂的用量比为：

2.5ml：0.1g或2.5ml：0.05g。

5.应用权利要求1-4任一所述的装置提取细菌质粒DNA的方法，其特征在于：所述装置的规格为2.5ml时，提取细菌质粒DNA的步骤如下：

(1)将革兰氏阴性菌扩大培养后，取1-6ml菌液，离心弃上清；

(2)加200μl细胞悬浮液以悬浮步骤1中的细菌；

(3)向步骤(2)的细胞悬浮液中加入200μl细胞裂解液，温和颠倒混匀2-3次，此时溶液应变为澄清，步骤(3)操作时间不超过1分钟；

(4)向步骤(3)的溶液中加300μl质粒结合液，温和颠倒混匀3-5次，12000rpm离心5-8分钟；

(5)用权利要求1-4任一所述的装置吸取ddH₂O1-2ml清洗2-3次，挤干；装置中，SiO₂粉末的质量为0.1g；

(6)拉动推杆将步骤(4)中的离心上清吸入权利要求1或2所述的装置中，上下颠倒混匀3-5次，推动推杆挤出液体；

(7)拉动推杆吸入500μl去蛋白液，上下颠倒2-3次，挤出液体；

(8)拉动推杆吸入500μl洗涤液1，上下颠倒2-3次，挤出液体；

(9)重复步骤(7)一次；

(10)拉动推杆吸入400μl洗涤液2，迅速混匀挤出液体；

(11)拉动推杆吸入50-300μl洗脱液，静置1-2min，期间每10s颠倒混匀一次，将液体挤到新的容器中，获得质粒；

其中，步骤(2)中所述细胞悬浮液的配方为：50mmol/LTris，10mmol/LEDTA，1-10μg/mLRNaseA；以超纯水为溶剂，pH6.0-9.0；

步骤(3)中所述细胞裂解液的配方为：0.05-1.5mol/LNaOH，质量体积百分比为1％-3％的SDS；以超纯水为溶剂；

步骤(4)中所述质粒结合液的配方为：2-6mol/LGuHCl，0.01-1mol/LCH₃COOK；以超纯水为溶剂，pH3-5；

步骤(7)中所述去蛋白液的配方为：2-6mol/LGuHCl，100mmol/LTris，20mmol/LEDTA，体积百分比10％-30％的异丙醇；以超纯水为溶剂，pH6-8；

步骤(8)中所述洗涤液1的配方为：体积百分比30％-90％乙醇；

步骤(10)中所述洗涤液2的配方为：ddH₂O；

步骤(11)中所述洗脱液的配方为：10mmol/LTris，1mmol/LEDTA；以超纯水为溶剂，pH7-12。