[发明专利]角鲨烯作为橄榄油和油茶籽油鉴别标记物的建立方法

权利要求书

1.一种角鲨烯作为橄榄油和油茶籽油鉴别标记物的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取角鲨烯标准品，用色谱级正己烷配制成梯度溶液，通过GC测定，建立标准曲线；

（2）将橄榄果破碎，用物理压榨法提取橄榄油；通过化学溶剂法提取油茶籽油；

（3）取微量标准橄榄油或者油茶籽油；橄榄油的取样量为5 mg，油茶籽油为100 mg；

（4）加入氢氧化钾-乙醇溶液对样品进行高温皂化处理；

（5）冷却至室温，加入饱和氯化钠溶液后用石油醚萃取样品中的角鲨烯；

（6）静置分层，分离上清液后加入纯水，洗至中性；

（7）静置分层，分离上清液后加入少量无水硫酸钠；

（8）震荡后离心，取上清液并吹干；

（9）加入有机溶剂复溶后过膜；所述有机溶剂为正己烷，过0.45 μm的有机膜；

（10）氮气吹干后加入正己烷复溶后进GC进行检测；

（11）将气相色谱图上角鲨烯峰面积带入标准曲线计算出角鲨烯含量；

（12）对油茶籽油和橄榄油角鲨烯含量进行差异性分析；

（13）利用GC-MS对样品中角鲨烯和标准品角鲨烯的出峰时间、碎片图和化学结构比对。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（11）中所述标准曲线得出的线性回归方程：y=0.3662x-1.0791，R²=0.9999。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（11）中，橄榄油、油茶籽油中橄榄油和油茶籽油中角鲨烯含量含量分别为0.15±0.07 mg/g和6.72±2.05 mg/g，p＜0.01。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）中氢氧化钾-乙醇溶液浓度为2 mol/L，添加量为5 mL，皂化温度为85 ℃，皂化时间为60 min。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（8）中，离心速度为2000 r/min，离心时间为5 min。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（11）中用所用色谱柱为HP-5MS，仪器为Agilent 7890A型气相色谱仪器。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，进一步所述气相色谱条件为：载气：高纯氮气；进样口温度：250℃；检测器FID温度270℃；柱温100℃，2 min，15 ℃/min升温至290℃，5 min；进样量1 μL，分流比50:1。

8.一种如权利要求1所述角鲨烯作为橄榄油和油茶籽油鉴别标记物的建立方法的应用，其特征在于，包括以下步骤：从待测的橄榄油或油茶籽油中取样品进行高温皂化处理，用石油醚萃取角鲨烯，用气相色谱仪检测得到待测样品中角鲨烯的峰面积，将峰面积代入所述的标准曲线，得到待测样品的角鲨烯含量；将待测样品的角鲨烯与参考橄榄油或参考油茶籽油中的角鲨烯含量相比较，判断待测的橄榄油或油茶籽油的种属来源或者真伪。