[发明专利]一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法

权利要求书

1.一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将高山杜鹃“红粉佳人”外植体消毒后转接到愈伤组织培养基中进行培养，诱导产生愈伤组织；

所述的外植体消毒的方法：用质量浓度75%的酒精处理外植体30S，用无菌水冲洗4-5遍，再用质量浓度0.1%的氯化汞处理1分钟；

所述的愈伤组织培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2-ip 6mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，暗培养，培养时间30天；

其中1升WPM基本培养基成分为：

大量元素：NH₄NO₃ 400mg；(NH₄)₂SO₄ 132mg；MgSO₄·7H₂O 370mg；KH₂PO₄ 170mg；KNO₃400mg；K₂SO₄ 900mg；

钙盐：CaCl₂ 96mg；Ca(NO₃)₂·4H₂O 556mg；

微量元素：H₃BO₃ 6.2mg；MnSO₄·H₂O 22.3mg；Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg；CuSO₄·5H₂O 0.025mg；ZnSO₄·7H₂O 8.6mg；

铁盐：Na₂-EDTA 37.3mg；FeSO₄·7H₂O 27.8mg；

维生素：肌醇100mg；烟酸0.5mg；盐酸吡多醇0.5mg；盐酸硫胺素0.5mg；甘氨酸2mg；

（2）使用化学试剂秋水仙素处理愈伤组织，实现染色体加倍；

具体过程为：愈伤组织经过质量浓度0.05%的秋水仙素处理24h，用无菌水冲洗4次；

（3）选择质地呈颗粒状，颜色发红色的愈伤组织，转接到不定芽培养基中进行培养；

所述的不定芽培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基添加蔗糖30g、琼脂6.5g、TDZ 0.1mg、2-ip 1mg，定容水至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间45天；

（4）将分化出的不定芽转接到增殖培养基中进行增殖培养；

所述的增殖培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2-ip 3mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间60天；

（5）经过增殖培养的健壮良好组培苗接种到生根培养基中进行生根培养；

所述的生根培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中，添加蔗糖20g、琼脂粉6.5g、活性炭1g、IBA 0.8mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4；其中WPM培养基中NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄、7H₂O、KH₂PO₄、KNO₃、K₂SO₄量减少一半；培养温度22±2℃，光照强度3500Lux，培养时间90天；

（6）选择根系长到2-3cm的生根苗进行炼苗，用草炭土和珍珠岩配成的混合基质；

（7）炼苗移栽后在显微镜下进行染色体数目观察，筛选出染色体加倍后的植株苗。

2.根据权利要求1中所述的一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，其特征在于，步骤（6）中所述的混合基质，包括重量比为5:1的草炭土和珍珠岩。

3.根据权利要求1中所述的一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，其特征在于，步骤（7）具体的过程为：选择植株的茎尖和根尖，做好切片，在显微镜下观察染色体加倍情况。