[发明专利]一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法

说明书

技术领域

本发明属于生物育种领域，专用于高山杜鹃“红粉佳人”染色体倍性育种，特别是涉及一种一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法。

背景技术

高山杜鹃“红粉佳人”(Rhododendron Delavayi“Cosmopolitan”)杜鹃科杜鹃属，原产于我国中西部地区，常绿灌木和小乔木，外粉红内白的复色品种，植株茂密，株型舒展，叶绿色光亮。多倍体育种是一种有效的育种手段，也是植物进化的重要途径之一。“巨大型”是多倍体最显著的外部形态特征，表现出茎干粗壮、叶片宽厚、叶面粗糙、叶色加深、花冠大而厚实、花瓣增多、颜色浓艳，此外，还具有延迟某些花卉种类的花期、抗逆性增强等优点，提高花卉的观赏价值和商品价值。随着市场对该品种需求越来越多，需要进一步对高山杜鹃植物种质资源进行创新及新品种培育。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的提供一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍的技术方法，为实现发明的目的，本发明提供以下技术方案：

一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，包括以下步骤：

(1)将高山杜鹃“红粉佳人”外植体消毒后转接到愈伤组织培养基中进行培养，诱导产生愈伤组织；

(2)使用化学试剂秋水仙素处理愈伤组织，实现染色体加倍；

(3)将经过化学试剂秋水仙素处理愈伤组织转接到不定芽培养基中进行培养；

(4)将分化出的不定芽转接到增殖培养基中进行增殖培养；

(5)经过增殖培养的健壮良好组培苗接种到生根培养基中进行生根培养；

(6)选择根系长到2-3cm的生根苗进行炼苗，用草炭土和珍珠岩配成的混合基质；

(7)炼苗移栽后在显微镜下进行染色体数目观察，筛选出染色体加倍后的植株苗。

步骤(1)中所述的外植体消毒的方法：用质量浓度75％的酒精处理外植体30S，用无菌水冲洗4-5遍，再用质量浓度0.1％的氯化汞处理1分钟；

所述的愈伤组织培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2-ip 6mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，暗培养，培养时间30天。

步骤(2)具体过程为：愈伤组织经过质量浓度0.05％的秋水仙素处理24h，用无菌水冲洗4次；

步骤(3)中所述的不定芽培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基添加蔗糖30g、琼脂6.5g、TDZ 0.1mg、2-ip 1mg，定容水至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Iux，培养时间45天。

步骤(4)中所述的增殖培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM基本培养基中添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、2-ip 3mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。

步骤(5)生根培养基，由以下方法制备所得：230ml的WPM培养基中大量元素减一半，即其中WPM培养基中NH₄NO₃、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄.7H₂O、KH₂PO₄、KNO₃、K₂SO₄量减少一半，添加蔗糖20g、琼脂粉6.5g、活性炭1g、IBA0.8mg，用纯净水定容至1升，调整pH值5.4，培养温度22±2℃，光照强度3500Iux，培养时间90天。

步骤(6)中所述的混合基质，包括重量比为5:1的草炭土和珍珠岩。

步骤(7)具体的过程为：选择植株的茎尖和根尖，做好切片，在显微镜下观察染色体加倍情况。

本发明提供的一种高山杜鹃“红粉佳人”染色体加倍方法，用化学物质秋水仙素处理高山杜鹃“红粉佳人”愈伤组织从而诱导多倍体，对高山杜鹃植物种质资源进行创新，用于进一步培养新品种，提高观赏价值。

具体实施方式

结合实施例说明本发明的技术方案，应用化学物质秋水仙素处理高山杜鹃“红粉佳人”愈伤组织从而诱导多倍体。

其中，1升WPM基本培养基成分为：