[发明专利]一种华蟾素提取过程有效成分含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药制药领域，更具体地说，本发明涉及一种华蟾素提取过程有效成分含 量的测定方法。

背景技术

华蟾素来源于中华大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍Bufomelanostictus Schneider的皮经过提取分离得到，是我国自行研制的二类新药和国家中药保护品种，具 有调节免疫、抑制肿瘤细胞增殖、抗乙肝病毒的药理作用，在抗肿瘤、治疗慢性乙型肝炎 以及其他疾病的临床治疗上已经得到广泛的应用。

目前华蟾素的生产工艺为蟾皮加水提取、浓缩、醇沉、二次浓缩、二次醇沉、浓缩收 膏等，其中提取过程是华蟾素生产的关键单元操作。由于蟾皮提取液中成分众多复杂，对 其指标质控成分的含量进行快速测定比较困难。如果缺乏有效的质量检测手段，无法实时 监控提取过程中有效成分含量变化，会导致生产工艺很难得到精确控制，影响产品的均一 性和稳定性。因此，研究适于蟾皮提取过程中有效成分含量的测定方法，实现对华蟾素提 取过程中吲哚类生物碱、含固量的快速测定，有助于提高华蟾素提取生产过程的质量检测 水平，保证产品质量的均一性和稳定性。

发明内容

本发明的目的是提供一种华蟾素提取过程有效成分含量的测定方法，该方法能够有效 的解决华蟾素提取过程中有效含量的快速检测的难点，实现华蟾素提取终点的快速判断， 以提高过程单元的精确控制，最终提高华蟾素提取液质量的的批次间稳定性，保证了最终 产品质量。

为了实现本发明的这些目的和其它优点，提供一种华蟾素提取过程有效成分含量的测 定方法，包括如下步骤：

1、一种华蟾素提取过程有效成分含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1)收集不同批次提取过程中获取的不少于100份的华蟾素提取液样品，所述华 蟾素提取液样品包括验证集样品和校正集样品；

步骤2)采用传统分析方法分别测定华蟾素提取液样品的关键指标，包括吲哚类生物 碱含量和含固量；

步骤3)筛选光谱预处理方法、选择合适的光谱波段以及确定最佳主因子书，采集校 正集样品的近红外光谱图；建立近红外光谱与各关键指标之间的定量模型；

步骤4)采用与校正集样品相同的条件测定验证集样品的近红外光谱图，输入已建的 定量模型，评价所建立的定量模型的稳定性和预测能力；

步骤5)采用与校正集样品相同的条件测定未知样品的近红外光谱数据，输入已建的 定量模型获得各关键指标的预测信息。

优选的是，所述步骤1)中华蟾素提取液样品的制备过程为：取干净干燥的蟾皮分两 次提取，第一次提取加5倍蟾皮的纯净水，加热至沸腾后保温煎煮45min；第二次提取， 取第一次药渣加入6倍蟾皮的纯净水，加热至沸腾后保温煎煮30min，其中，第一次煎煮 每隔2.5min收集一次提取液，并补充相同体积的纯净水；第二次煎煮每隔5min收集一次 提取液，并补充相同体积的纯净水，重复n次不同批次华蟾素提取实验，并获得不少于 100份个华蟾素提取液样品，取其中一批作为验证集样品，其与n-1批为校正集样品。

优选的是，所述步骤2)中所采用的传统分析方法包括紫外-分光光度法、烘干法和称 重法，分别用于测定提取液样品中吲哚类生物碱含量和固含量。

优选的是，所述步骤3)中近红外光谱图采用透射法采集，波段范围为4000～10000cm^-1， 扫描次数为32次，分辨率为8cm^-1，光纤透射式探头光程为2mm，以温度25℃,湿度40％ 的空气为参比。

优选的是，所述步骤3)中所述的预处理方法包括：一阶微分法、二阶微分法、 Savitsky-Golay平滑法和Norris导数滤波平滑法。

优选的是，所述步骤3)中所述的定量模型采用化学计量软件中的偏最小二乘法建立 提取液药品中各关键指标近红外定量模型。

优选的是，所述步骤4)中判断所建立的定量模型的稳定性和预测能力的标准为：预 测偏差值小于10％。

本发明至少包括以下有益效果：