[发明专利]一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用

权利要求书

1.一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，其特征在于包括如下步骤：

(1)细胞膜悬液加入蛋白酶抑制剂后，用pH7-8的低渗液重悬细胞。超声破碎细胞。在4-10℃条件下，采用200-1000×g离心5-10min，取上清，再采用10000-20000×g离心15-30min，弃上清，取沉淀，采用5mM磷酸盐缓冲液(PBS)清洗沉淀3～5次，得到细胞膜。4℃贮存、备用。

(2)采用磁力或离心的方法将磁性微球从保护液中吸出。

(3)在振荡条件下，采用减压法将步骤1获得的细胞膜吸附于磁性微球表面，制备细胞膜磁性微球，将制备好的微球置于4-10℃，恒温振荡2-8h，使得细胞膜充分融合，即得。

(4)采用水或乙醇热回流提取药材活性成分1-3次，每次30min-120min，合并提取液，放冷，滤过后，4℃保存，备用。

(5)在37℃条件下，将细胞膜磁性微球与天然产物提取液共孵育10-60min。采用磁力、离心力等将吸附了活性成分的细胞膜磁性微球从提取液中分离，再采用磷酸盐缓冲液洗去未结合的化合物，采用10％-30％乙酸水溶液组成的解离液使活性化合物与细胞膜磁性微球表面的靶点解离，利用色谱质谱联用的方法测定解离液中的化合物组成。

2.根据权利要求1所述的一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，其特征在于将活体或培养的细胞的细胞膜固定于磁性微球，制备细胞膜磁性微球。

3.根据权利要求1所述的一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，其特征在于采用细胞膜磁性微球与天然产物共孵育，从而结合天然产物所含活性成分。

4.根据权利要求1所述的一种快速筛选天然产物活性成分的细胞膜磁性微球制备及其应用，其特征在于采用色谱质谱联用技术分析细胞膜磁性微球解离液中活性成分。