[发明专利]一种利用大肠杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法有效
| 申请号： | 201610227380.1 | 申请日： | 2016-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN107287172B | 公开（公告）日： | 2021-02-02 |
| 发明（设计）人： | 丁雪峰 | 申请（专利权）人： | 南京诺云生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 张慧清 |
| 地址： | 210000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 大肠杆菌 发酵 生产 磷酸化酶 方法 | ||
1.一种利用大肠杆菌发酵生产胸苷磷酸化酶的方法，其特征是：包括以下步骤：
（1）挑取含有SEQ ID NO.3表达载体的大肠杆菌单菌落接种于高压灭菌后的一级培养基中，30℃，250rpm，过夜培养；
（2）将步骤（1）获得的产品按照1:100的接种比例接入到高压灭菌后的二级培养基中，于30℃中培养至菌体OD值5-6后，立即将其置于25℃中，震荡，250rpm培养1小时；
（3）向步骤（2）获得的产品中加入IPTG至其终浓度为0.1mM，并于25℃，250rpm继续培养16小时；
（4）将培养液于4℃条件下，12000g下离心20分钟，收集湿菌体，然后利用菌体进一步发酵生产胸苷磷酸化酶；获得湿菌体后，还包括以下步骤：将湿菌体沉 淀用蒸馏水清洗两次，收集菌体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：其中一级培养基由下列物质组成：胰蛋白胨10 g/L，酵母提取物5 g/L，磷酸氢二钠3.55 g/L，磷酸二氢钾3.4 g/L，氯化铵2.68 g/L，硫酸钠0.71 g/L，七水硫酸镁0.493 g/L，六水氯化铁0.027 g/L，甘油5g/L，葡萄糖0.8g/L，添加卡那霉素至50mg/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：二级培养基由下列物质组成：胰蛋白胨 10g/L，酵母提取物5 g/L，磷酸氢二钠3.55 g/L，磷酸二氢钾3.4 g/L，氯化铵2.68 g/L，硫酸钠0.71 g/L，七水硫酸镁0.493 g/L，六水氯化铁0.027 g/L，甘油5g/L，葡萄糖0.3g/L，添加卡那霉素至50mg/L。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京诺云生物科技有限公司，未经南京诺云生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610227380.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种酶及其应用
- 下一篇：一种胸苷磷酸化酶蛋白突变体
