[发明专利]一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法，涉及技术领域为通过提高种子繁育水平进而达到保存及扩繁极小种群的目的。

背景技术

广西越桔属于杜鹃花科越桔属(Vaccimium)植物，为常绿小灌木，生于海拔1200-1700米的林中、山谷石上或附生于壳斗科植物树干上。广西越桔主要分布于湖南、广东和广西。2003年，“凤阳山珍稀植物和植被调查”首次发现并报道了广西越桔在浙江省的分布，但其数量稀少，全省分布少于50株，被列入浙江省极小种群保护名录。目前，越桔常见的繁殖方式有实生、分株和扦插，但由于其种子小且萌发条件严苛，在自然条件下繁殖较困难；而分株繁殖的繁殖系数比较低；扦插繁殖的环境管理要求比较高，成活率不高。越桔的繁殖困难在一定程度上制约了其在自然条件下的种群数量及分布范围。因此，急需一套完整的能够提高广西越桔繁殖水平的技术来保存广西越桔，防止极小种群广西越桔因在自然条件下繁殖困难而灭绝，然而目前为止还没有关于这方面的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：一种通过未成熟种子保存极小种群广西越桔后代的方法，包括如下步骤：

(1)采集广西越桔植株上表面呈现绿色、表皮坚硬的未成熟果实，消毒后，用解剖刀切开未成熟果实，剥取未成熟种子连同部分子房组织，接种到培育培养基上；于25℃黑暗条件下培养24h，再在弱光照条件下(光照强度为20μmol·m^-2·s^-1、光照时间为12小时/天)培养，直到种子成熟；

(2)种子发育成熟后，将种子转移至萌发培养基上进行诱导萌发，培养条件：温度为25℃、光照强度为20μmol·m^-2·s^-1、光照时间为12小时/天；

(3)种子萌发后，将幼苗转移到生长培养基上进行壮苗培养，并且可以通过扩繁培养基诱导其腋芽生长，进行大量扩繁。壮苗后将植株转移至生根培养基上进行生根培养。培养条件：温度为25℃、光照强度为50μmol·m^-2·s^-1、光照时间为12小时/天；

(4)待植株生根后，将其炼苗后转移至营养土中栽培，栽培条件：温度为22/18℃、光照强度为50μmol·m^-2·s^-1、光照时间为12小时/天。

进一步地，在所述步骤(1)中，所述消毒程序为：①将未成熟果实在洗洁精水(在1L水中加入5ml洗洁精)中浸泡清洗20分钟；②用自来水冲洗浸泡过的果实2个小时；③在超净工作台上，将冲洗后的未成熟果实在体积分数为75％的乙醇水溶液中浸泡30秒，浸泡后用无菌水冲洗果实3次，每次1分钟；④用质量体积比为0.1％的升汞水溶液浸泡消毒10分钟，期间摇动3-5次，消毒结束后用无菌水冲洗5次，每次1分钟；⑤将冲洗后的果实置于无菌滤纸上，将果实表皮上多余的水分吸干。

进一步地，在所述步骤(1)中，所述未成熟种子剥取方法为用灭菌解剖刀切除果实上下两端各0.3cm，然后纵向切开，左手持镊子夹住果实外皮，右手持解剖刀将未成熟种子及部分子房组织取下；

进一步地，根据现有的记载和观察，在所述步骤(1)中，所述未成熟种子的种皮表面呈浅黄褐色，所述成熟种子的种皮表面呈现深棕褐色。

进一步地，在所述步骤(1)中，培育培养基以WPM(Woody Plant Medium)为基本培养基，另外添加蔗糖、琼脂、活性炭、谷氨酰胺、酶水解酪蛋白，蔗糖、琼脂、活性炭、谷氨酰胺、酶水解酪蛋白的浓度分别为0.03g/mL、0.012g/mL、0.002g/mL、0.0004g/mL、0.0005g/mL，pH为5.0；

进一步地，在所述步骤(2)中，所述萌发培养基由WPM、蔗糖、琼脂、6-苄氨基腺嘌呤和赤霉素组成，蔗糖、琼脂、6-苄氨基腺嘌呤、赤霉素的浓度分别为0.03g/mL、0.012g/mL、1×10^-6g/mL、1.5×10^-6g/mL，pH为5.0；

进一步地，在所述步骤(3)中，所述生长培养基由WPM、蔗糖、琼脂组成，蔗糖、琼脂的浓度分别为0.03g/mL、0.012g/mL，pH为5.0；