[发明专利]长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定方法及其使用的锈菌菌液

权利要求书

1.一种用于长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定的锈菌菌液，其特征在于该锈菌菌液的制 备方法如下：

1)从田间采集感锈病的叶片，用含0.1％Tween-20的蒸馏水清洗病叶上的锈病孢子， 镜检后调整孢子浓度至10²/ml，将此菌液接种在感病品种‘之豇282’生长10天的幼嫩叶片 上，每片叶子接4-6个点，每个点接10μl菌液，接种后将培养皿置于光照培养架上，光照强度 为80-100μmol/m²/s，温度在25℃，光周期16/8h，保持培养皿内滤纸湿润，培养7-10天；

2)选择步骤1)中‘之豇282’叶片上出现的单个孢子堆，用牙签将之接种在新的‘之豇 282’叶片上，利用步骤1）相同方法将孢子扩繁2-3次，最后获得的即为纯化的锈菌株系，编 号为Auv-1锈菌；Auv-1锈菌应始终保存在活体的‘之豇282’叶片上，在前一批叶子枯黄前， 将之转移至新鲜的叶子上；

3)将Auv-1锈菌在‘之豇282’叶片上大量扩繁，利用含0.1％Tween-20的蒸馏水清洗孢 子，用4层纱布过滤菌丝后制成10⁵/mL孢子悬浮液。

2.一种长豇豆种质锈病抗性的离体鉴定方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1)离体叶片制备：待鉴定品种种子在光照培养箱中萌发，培养条件为28℃光照16小时， 25℃黑暗8小时，光强度100μmol/m2/s，湿度为80%，种子出苗后取第一片三出复叶，用含 0.1%Tween-20的蒸馏水清洗叶片，随后将叶片置于含两层湿润滤纸的培养皿中，叶柄接触 滤纸，每个培养皿4-6片叶；

2)接种鉴定：用移液器将制备好的权利要求1所述的锈菌菌液接种在离体叶片上，每片 叶子接4-6个点，接种点均匀分布在主叶脉两侧，每个点接15μl菌液；接种后将培养皿置于 光照培养架上，温度保持在25℃，光照强度为80-100μmol/m2/s，光周期16/8h，同时保持培 养皿内滤纸湿润，每天进行通风换气；实验中设置感病对照和抗病对照，感病对照为‘之豇 282’，抗病对照为‘ZN016’；接种约10天后调查鉴定材料病斑类型、大小、孢子堆的形成及破 裂情况、结晶物出现与否，将锈病抗性分为0-4级，具体标准如下：

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